Matriz de ADN

Produtos de matriz de ADN

I. Materiais necessários

Tampões

- Solução de Pr7bridação: 5xSSC, 0,1%SDS, 0,1%BSA
- 2x solução de hibridização: 40-70%Formamida, 10xSSC, 0,2% SDS, 0,02%d'ADN de sperma de ssalmão  (opcional)
- Solução de lavagem 1: 2xSSC, 0,1%SDS
- Solução de lavagem 2: 0,1xSSC, 0,1%SDS
- Solução de lavagem 3: 0,1xSSC
Material

- Caixas para pré-hibridização e hibridização
- Câmara de hibridação
- Micropipetas de canal único de 20 a 1000 A3 com pontas descartáveis
- Pipetas graduadas de 5 ml e 10 ml
- Bain marie

II. Duração da experiência

- 30 min de pré-hibridação
- 12 a 16 horas de hibridização
- 10 min de lavagens
- TOTAL: 13 a 17 horas

III. Procedimento de funcionamento

Pré-hibridação
1. Preparar um volume adequado de solução de pré-hibridação.
Nota: O volume necessário depende da caixa utilizada, o nível deve atingir o código de barras da lâmina.
2. Pré-aquecer a solução até 55 C.
3. Coloque as lâminas na solução e incubar durante 30 min com agitação.
4. Enxaguar 5 vezes com H2O

Hibridização padrão
1. Preparar a solução de hibridização 2x
2. Misturar a amostra marcada com a solução de hibridização 2x
3. Ajuste o volume para chegar a uma concentração de 1x e misture
4. Incubar durante 2 minutos a 95 C

5. Coloque a lâmina e coloque-a na câmara de hibridação
6. Incubar durante 12 a 16 horas a 42

Hibridização De Lavagem
1. Preparar as soluções de lavagem 1, 2 e 3.
2. Retire a lâmina da câmara de hibridização e coloque - a na solução de lavagem 1
3. Incubar com agitação durante 5 min
4. Transferir para a solução 2 e incubar, mexendo durante 5 min
5. Transferir para o primeiro volume da solução 3 e incubar, mexendo durante 1 min
6. Repita o Passo 5.