Matrizes de anticorpos baseadas em rótulos
Introdução
Com os arrays de anticorpos baseados em etiquetas, os pesquisadores agora podem obter uma visão panorâmica ampla da expressão de citocinas. Os níveis de expressão de centenas de proteínas alvo podem ser detectados simultaneamente, incluindo citocinas, quimiocinas, fatores de crescimento, fatores angiogênicos, proteases, receptores solúveis e outras proteínas em sobrenadantes de culturas celulares e outros fluidos corporais. Além disso, um controle interno é utilizado para monitorar todo o processo, incluindo a biotinilação, de modo que este array abrangente possa identificar com precisão as citocinas disponíveis em sua amostra.
Através de um processo simples, a amostra é biotinilada e depois dializada em preparação para incubação com os arrays. O processo é fácil de entender e envolve a biotinilação da amina primária das proteínas na amostra. A partir daí, a amostra recém-biotinilada é adicionada ao array de anticorpos, seja em membrana ou em lâmina de vidro, e incubada à temperatura ambiente. Após a incubação com HRP conjugado a estreptavidina ou Hilyte Fluor 555 conjugado a estreptavidina, os sinais podem ser visualizados por quimioluminescência ou fluorescência, respectivamente.
Conteúdo do Kit
- Tubos de Diálise e Suporte Flutuante
- Reagente de Marcação
- Solução Parada
- Raybio® Array de Anticorpos Baseado em Biotina sobre lâmina de vidro com moldura ou sobre membranas
- Buffer Bloqueador
- Buffer de Lavagem 20X I
- Buffer de Lavagem 20X II
- HRP conjugado a estreptavidina ou Hilyte Fluor 555 conjugado a estreptavidina
- Filme Adesivo
- Buffer de Soro (somente nos kits L-Series com lâmina de vidro)
- Coluna de Spin
Como funciona
Diagrama do Assay
As amostras são dializadas antes da etapa de biotinilação. Através de um processo simples, a amina primária das proteínas na amostra é biotinilada, seguida por diálise para remover o biotina livre. A partir daí, a amostra recém-biotinilada é adicionada à membrana do array ou à lâmina de vidro e incubada à temperatura ambiente. Após a incubação com HRP conjugado a estreptavidina ou Fluor conjugado a estreptavidina, os sinais podem ser visualizados por quimioluminescência ou fluorescência. O procedimento experimental é simples e pode ser realizado em qualquer laboratório.
| 1. Sobrenadante de cultura celular | 2. Soro ou plasma |
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