Substrato NeoPRO Femto Western ECL

O Substrato ECL Western NeoPRO Femto é um substrato quimioluminescente de dois componentes desenvolvido para Western blotting e detecção de proteínas baseada em HRP. Ele fornece um nível de detecção na faixa de femtogramas médios a baixos e é particularmente adequado para aplicações que exigem sensibilidade muito alta e detecção confiável de alvos proteicos de baixa abundância.

O substrato baseia-se em um sistema de detecção quimioluminescente derivado de luminol. Durante a detecção, a peroxidase de rábano catalisa a oxidação do derivado de luminol, gerando luz a aproximadamente 425 nm. Componentes intensificadores incorporados na formulação aumentam a intensidade e a duração do sinal quimioluminescente.

O Substrato ECL Western NeoPRO Femto gera um sinal quimioluminescente forte na presença de um nível de fundo muito baixo, proporcionando uma alta relação sinal-ruído. Sua duração de sinal estendida facilita a aquisição repetida de imagens e a otimização das condições de exposição.

O produto é fornecido como um kit de duas soluções contendo uma solução de derivado de luminol/intensificador e uma solução de peróxido. Os dois componentes são misturados na proporção de 1:1 imediatamente antes do uso para preparar a solução de trabalho.

• Substrato quimioluminescente de dois componentes para Western blotting
• Desenvolvido para detecção de proteínas na faixa de femtogramas médios a baixos
• Sensibilidade muito alta para alvos proteicos de baixa abundância
• Sinal quimioluminescente forte com um nível de fundo muito baixo
• Alta relação sinal-ruído para visualização clara de bandas de baixa intensidade
• Duração do sinal quimioluminescente estendida
• Detecção quimioluminescente dependente de HRP
• Soluções de derivado de luminol/intensificador e peróxido fornecidas separadamente
• Solução de trabalho preparada misturando os dois componentes na proporção de 1:1
• Compatível com anticorpos secundários conjugados com HRP
• Compatível com membranas de nitrocelulose e PVDF para Western blot
• Adequado para aquisição de sinal usando sistemas de imagem por quimioluminescência ou filme de autorradiografia
• Diluição recomendada do anticorpo primário: 1:5.000–1:50.000
• Diluição recomendada do anticorpo secundário: 1:50.000–1:250.000
• Apenas para uso em pesquisa

1. Preparar a solução de trabalho: Misture volumes iguais da Solução A e da Solução B na proporção de 1: 1 imediatamente antes do uso.
2. Evitar contaminação cruzada: Use ponteiras de pipeta limpas e separadas para cada solução de estoque. Não introduza a Solução A na Solução B ou a Solução B na Solução A.
3. Preparar a membrana: Após a incubação com o anticorpo primário e o anticorpo secundário conjugado com HRP, lave a membrana minuciosamente com tampão TBS-T.
4. Enxaguar antes da detecção: Remova a membrana da bandeja de lavagem, enxágue-a duas vezes com TBS-T e mantenha-a úmida até a aplicação do substrato.
5. Remover o excesso de tampão: Permita que o excesso de tampão escoe de um canto da membrana sem permitir que a membrana seque.
6. Aplicar o substrato: Aplique aproximadamente 0,1 mL de solução de trabalho NeoPRO Femto preparada por cm² de membrana.
7. Incubar: Coloque a membrana com o lado das proteínas para cima e certifique-se de que a solução de trabalho cubra completamente a superfície da membrana. Incube por aproximadamente 1,5 minuto.
8. Adquirir o sinal: Detecte o sinal quimioluminescente usando um dispositivo de imagem compatível ou filme de autorradiografia.
9. Otimizar a exposição: Quando a intensidade de sinal esperada for desconhecida, tempos de exposição iniciais de 15 segundos, 30 segundos, 1 minuto e 5 minutos podem ser testados.
10. Otimizar as diluições de anticorpos: Ajuste as concentrações dos anticorpos primário e secundário quando necessário para obter um sinal específico forte com fundo mínimo.