NeoPRO Atto Western ECL Substrate

Le NeoPRO Atto Western ECL Substrate est un substrat chimiluminescent ultra-sensible à deux composants, conçu pour le Western blot et la détection de protéines basée sur la peroxydase de raifort (HRP). Il offre une intensité de signal extrêmement élevée pour la détection de quantités infimes de protéines et est particulièrement adapté aux cibles très faiblement et extrêmement faiblement exprimées.

Ce substrat repose sur un système de détection chimiluminescent dérivé du luminol. Lors de la détection, la peroxydase de raifort catalyse l'oxydation du dérivé de luminol, produisant une émission lumineuse d'environ 425 nm. Des composants amplificateurs intégrés à la formulation augmentent le rendement lumineux, générant des bandes protéiques très intenses en des temps d'exposition courts.

Le NeoPRO Atto Western ECL Substrate est conçu pour améliorer la détection et l'interprétation des bandes de Western blot les plus faibles. Sa très haute sensibilité le rend adapté aux expériences impliquant des quantités infimes de protéines, des quantités limitées de lysat cellulaire ou des anticorps fortement dilués, contribuant ainsi à préserver les échantillons précieux et les anticorps primaires coûteux.

Le produit est fourni sous la forme d'un kit à deux solutions contenant une solution de dérivé de luminol/amplificateur et une solution de peroxyde. Les deux composants sont mélangés selon un rapport 1 : 1 immédiatement avant utilisation afin de préparer la solution de travail.

• Substrat chimiluminescent ultra-sensible à deux composants pour le Western blot
• Conçu pour la détection de quantités infimes de protéines
• Intensité de signal chimiluminescent extrêmement élevée
• Adapté aux protéines cibles extrêmement faiblement exprimées
• Produit des bandes très intenses en des temps d'exposition courts
• Améliore la visualisation et l'interprétation des bandes de Western blot les plus faibles
• Adapté aux échantillons biologiques limités ou précieux
• Permet l'utilisation d'anticorps primaires et secondaires fortement dilués
• Peut réduire la consommation d'échantillons précieux et d'anticorps coûteux
• Détection chimiluminescente dépendante de la HRP
• Solutions de dérivé de luminol/amplificateur et de peroxyde fournies séparément
• Solution de travail préparée par mélange des deux composants selon un rapport 1 : 1
• Compatible avec les anticorps secondaires conjugués à la HRP
• Compatible avec les membranes de Western blot en nitrocellulose et en PVDF
• Adapté aux systèmes d'imagerie par chimiluminescence et aux films d'autoradiographie
• Dilution recommandée de l'anticorps primaire : 1 : 10 000 à 1 : 200 000
• Dilution recommandée de l'anticorps secondaire : 1 : 300 000 à 1 : 1 000 000
• Réservé à un usage de recherche uniquement

1. Préparer la solution de travail : Mélanger des volumes égaux de la Solution A et de la Solution B selon un rapport 1 : 1 immédiatement avant utilisation.
2. Éviter la contamination croisée : Utiliser des embouts de pipette propres et séparés pour chaque solution mère. Ne pas introduire la Solution A dans la Solution B ni la Solution B dans la Solution A.
3. Préparer la membrane : Après l'incubation des anticorps primaire et secondaire conjugué à la HRP, laver la membrane abondamment avec du tampon TBS-T.
4. Rincer avant la détection : Retirer la membrane de son bac, la rincer deux fois avec du TBS-T et la maintenir humide jusqu'à l'application du substrat.
5. Éliminer l'excès de tampon : Laisser l'excès de tampon s'écouler par un coin de la membrane sans laisser celle-ci sécher.
6. Appliquer le substrat : Appliquer environ 0,1 mL de solution de travail NeoPRO Atto préparée par cm² de membrane.
7. Incubation : Placer la membrane face protéique vers le haut et s'assurer que la solution de travail recouvre complètement la surface de la membrane. Incuber pendant environ 1,5 minute.
8. Acquérir le signal : Détecter le signal chimiluminescent à l'aide d'un système d'imagerie compatible ou d'un film d'autoradiographie.
9. Commencer par une exposition courte : Étant donné que NeoPRO Atto produit une émission lumineuse extrêmement élevée, commencer par un temps d'exposition court et l'augmenter uniquement si nécessaire.
10. Optimiser les dilutions d'anticorps : Diluer suffisamment les anticorps pour obtenir un signal spécifique tout en limitant le bruit de fond, la saturation et l'épuisement rapide du substrat.