Les anticorps primaires anti-cheval conjugués à la phosphatase alcaline (AP) sont des immunoréactifs marqués par une enzyme, destinés à la détection colorimétrique, chimiluminescente et fluorescente des antigènes d'origine équine dans les applications nécessitant une grande stabilité du signal. Produits par immunisation d'animaux hôtes, tels que la chèvre ou le lapin, avec des immunoglobulines de cheval purifiées, ces anticorps sont purifiés par chromatographie d'immunoaffinité puis conjugués à la phosphatase alcaline (AP), une métalloenzyme d'environ 140 kDa, généralement isolée de l'intestin de veau ou de tissus bovins. La phosphatase alcaline catalyse l'hydrolyse des esters phosphoriques, permettant la détection à l'aide de substrats tels que le BCIP/NBT (formation d'un précipité bleu-violet), le p-nitrophényl phosphate (pNPP, produisant un composé soluble jaune) ou le CDP-Star® (émission chimiluminescente). Contrairement à la peroxydase de raifort (HRP), la phosphatase alcaline permet une génération continue du signal sans épuisement rapide du substrat et présente une meilleure stabilité en présence d'azoture de sodium et d'autres agents conservateurs.
Applications
Les anticorps conjugués à la phosphatase alcaline sont largement utilisés en ELISA, où le pNPP permet une quantification colorimétrique sensible des titres d'anticorps équins. En immunohistochimie (IHC) et en hybridation in situ, les précipités formés par le BCIP/NBT génèrent des signaux chromogéniques permanents, adaptés à l'archivage à long terme des lames. En Western blot, les substrats chimiluminescents de la phosphatase alcaline, tels que le CDP-Star® ou l'APS-5, permettent la détection de protéines équines faiblement abondantes. Parmi les autres applications figurent les dot blots, les microréseaux tissulaires (tissue microarrays) et les immunodosages sur membrane, notamment lorsque l'activité des peroxydases endogènes est susceptible d'interférer avec les résultats.
Performances et recommandations d'utilisation
Les dilutions de travail recommandées sont généralement comprises entre 1:500 et 1:10 000, selon le substrat utilisé, le format de l'essai et les conditions expérimentales. Les conjugués à la phosphatase alcaline sont particulièrement adaptés aux applications nécessitant un développement prolongé du signal et une sensibilité élevée. Ces réactifs sont exclusivement destinés à un usage en recherche (RUO) et ne sont pas conçus pour des applications diagnostiques.
