La phosphatase alcaline (AP) est une enzyme hydrolase largement utilisée pour le marquage des anticorps afin d'obtenir une détection hautement sensible dans les immunodosages. Les anticorps anti-hamster conjugués à la phosphatase alcaline sont généralement produits chez des espèces hôtes telles que la chèvre ou le lapin et sont destinés à détecter des anticorps primaires ou des antigènes d'origine hamster. Le conjugué AP génère un signal détectable en catalysant la conversion de substrats incolores ou non fluorescents, tels que le p-nitrophényl phosphate (pNPP) ou le système BCIP/NBT, en produits colorés, fluorescents ou chimioluminescents. Cette stratégie de détection rend les anticorps conjugués à l'AP particulièrement adaptés aux applications telles que l'immunohistochimie (IHC), le dosage immuno-enzymatique (ELISA), le Western blot et l'immunomicroscopie électronique.
Production, purification et spécificité
Les anticorps anti-hamster conjugués à la phosphatase alcaline sont obtenus par immunisation d'animaux hôtes avec des IgG de hamster purifiées, sous forme d'immunoglobulines entières ou de fragments sélectionnés, suivie d'une purification par chromatographie d'immunoaffinité utilisant des IgG de hamster immobilisées sur une matrice d'agarose. Afin d'améliorer leur spécificité et de réduire les liaisons non spécifiques, de nombreux anticorps commerciaux sont adsorbés de manière croisée (cross-adsorbed) contre les protéines sériques d'autres espèces, notamment la souris, le rat, les bovins et l'Homme. Une attention particulière doit être portée à la spécificité de souche, car les anticorps peuvent avoir été produits contre les IgG du hamster arménien, du hamster syrien doré ou des deux espèces. Le choix du réactif approprié est donc essentiel pour obtenir des résultats expérimentaux fiables et reproductibles.
Recommandations techniques et considérations
Les dilutions initiales recommandées dépendent de l'application expérimentale et sont généralement comprises entre 1:200 et 1:1 000 pour l'immunohistochimie, entre 1:500 et 1:3 000 pour le Western blot, et entre 1:2 000 et 1:10 000 pour les dosages ELISA. Les anticorps conjugués à la phosphatase alcaline doivent être conservés entre 2 et 8 °C et ne doivent pas être congelés, car la congélation peut réduire significativement l'activité enzymatique. Les conditions expérimentales pouvant varier d'un laboratoire à l'autre, une optimisation empirique par titration est recommandée afin de déterminer la concentration optimale d'anticorps et d'obtenir le meilleur compromis entre l'intensité du signal et le bruit de fond.
