L’angiogenèse, c’est-à-dire la formation de nouveaux vaisseaux sanguins à partir d’un réseau vasculaire préexistant, constitue un processus essentiel au développement, à la réparation tissulaire et à de nombreuses pathologies, notamment le cancer. Pour étudier l’angiogenèse in vitro, les tests de formation de tubes sont largement utilisés comme modèles rapides et quantifiables reproduisant les étapes clés du comportement des cellules endothéliales lors de la néovascularisation. Ces essais permettent d’examiner les mécanismes moléculaires, de cribler des composés pro- ou anti-angiogéniques et d’explorer les voies génétiques impliquées dans la formation des vaisseaux.
Méthodologie du test de formation de tubes
Le test de formation de tubes par les cellules endothéliales consiste à ensemencer des cellules endothéliales — telles que les cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine (HUVECs) ou des lignées endothéliales murines — sur une matrice de membrane basale (par exemple Matrigel, collagène ou gels de fibrine) qui reproduit l’environnement de la matrice extracellulaire. Les cellules adhèrent rapidement, s’alignent et forment des réseaux tubulaires de type capillaire, généralement observables entre 2 et 16 heures.
Les étapes clés comprennent :
- Préparation de la matrice de membrane basale : Une fine couche de matrice extracellulaire est polymérisée sur des plaques ou des puits de culture, fournissant un support structurel aux cellules.
- Ensemencement des cellules : Les cellules endothéliales sont remises en suspension dans un milieu de formation de tubes contenant les nutriments et facteurs de croissance essentiels, puis déposées sur la matrice.
- Incubation et suivi : Les cellules commencent à étendre des prolongements et à migrer, formant des structures tubulaires interconnectées avec apparition de lumières en quelques heures.
- Visualisation et quantification : Les réseaux tubulaires sont observés en microscopie à contraste de phase ou en fluorescence. La quantification repose sur la mesure de la longueur totale des tubes, du nombre de points de branchement, de boucles et de la surface des tubes.
Applications
- Étudier la régulation moléculaire et génétique de l’angiogenèse.
- Évaluer les propriétés pro- ou anti-angiogéniques de composés pharmaceutiques.
- Analyser les effets de composés naturels ou synthétiques sur la formation vasculaire.
- Explorer les mécanismes pathologiques impliquant une angiogenèse anormale, tels que le cancer, la rétinopathie diabétique ou les plaies chroniques.
