Le principe de la chromatographie repose sur deux phases : la phase mobile, qui entraîne l’échantillon, et la phase stationnaire, qui permet sa purification. Les résines de chromatographie constituent cette phase stationnaire.
Il existe différents types de chromatographie en fonction du type de résine utilisé. Les quatre principaux types de chromatographie comprennent la chromatographie d’affinité, la chromatographie échangeuse d’ions (IEX), la chromatographie d’interaction hydrophobe (HIC), et la chromatographie d’exclusion de taille (SEC). La plupart des systèmes de purification nécessitent l’utilisation de plusieurs de ces méthodes chromatographiques afin d’atteindre la pureté requise pour les applications en aval. Le choix de la (des) méthode(s) chromatographique(s) la (les) plus appropriée(s) ainsi que leur ordre sont essentiels dans l’optimisation d’une méthode de purification des protéines.
Comparaison des principaux types de chromatographie
| Type de chromatographie | Principe de séparation | Liaison | Élution |
|---|---|---|---|
| Affinité | Interaction spécifique | Pas de ligand de compétition | Ligand de compétition (spécifique), rupture des interactions protéines/protéines par changement de conditions (non spécifique) |
| Échange d'ions | Charge de surface nette | Force ionique faible | Force ionique élevée, pH croissant (cations) ou décroissant (anions) |
| Interactions hydrophobes | Hydrophobicité | Force ionique élevée | Force ionique faible |
| Exclusion de taille | Rayon hydrodynamique |
