Le master mix pour PCR digitale est une formulation prête à l’emploi spécialement conçue pour les analyses de PCR digitale (dPCR), permettant l’amplification précise et la quantification absolue de cibles ADN ou ARN après partitionnement de l’échantillon. Il contient généralement une ADN polymérase thermostable, un tampon réactionnel optimisé, des sels de magnésium, des dNTPs, des agents stabilisants ainsi que des composants compatibles avec la détection fluorescente par sondes ou colorants.
Contrairement aux réactifs de PCR conventionnelle, les master mix pour PCR digitale sont développés pour maintenir une amplification homogène et un signal stable dans des milliers de microcompartiments (gouttelettes, puits ou chambres microfluidiques). La littérature scientifique montre que la composition du mélange réactionnel influence fortement la stabilité des partitions, la séparation des signaux positifs/négatifs, l’efficacité d’amplification et la précision finale de la quantification. Un master mix performant est donc essentiel pour obtenir des résultats fiables et reproductibles.
Les master mix pour PCR digitale existent pour les essais à sondes hydrolytiques, les colorants intercalants, le génotypage, la détection de mutations rares, la RT-dPCR et les applications multiplex.
Importance des master mix pour PCR digitale
Les master mix permettent de :
- Assurer une amplification robuste dans les réactions partitionnées
- Améliorer la sensibilité pour les cibles faiblement abondantes
- Obtenir une séparation nette des signaux positifs et négatifs
- Garantir une quantification absolue précise
- Réduire la variabilité entre réactions
- Mieux tolérer certains inhibiteurs d’échantillons
- Faciliter l’analyse de mutations rares et des CNV
- Simplifier le workflow grâce à des formulations prêtes à l’emploi
