Histon-Acetyltransferase (HAT)-Assays sind analytische Methoden, die verwendet werden, um die enzymatische Aktivität von Histon-Acetyltransferasen zu messen. Diese Enzyme übertragen Acetylgruppen von Acetyl-Coenzym A (Acetyl-CoA) auf Lysinreste an Histonproteinen. Diese Assays werden weitläufig in der Epigenetik, Chromatinbiologie und Arzneimittelforschung eingesetzt, da die HAT-Aktivität eng mit der Genregulation und der Chromatinzugänglichkeit verbunden ist. Sie sind auch wertvolle Werkzeuge zum Screening von Verbindungen, die die HAT-Funktion hemmen oder modulieren.

Prinzip des Assays

Das grundlegende Prinzip eines HAT-Assays besteht in der Erkennung des Transfers von Acetylgruppen von Acetyl-CoA auf ein Histon-Substrat oder ein von Histonen abgeleitetes Peptid. Je nach Assay-Format kann das Reaktionsprodukt mit Hilfe von Radioisotop-Markierung, fluoreszenzbasierter Erkennung oder kolorimetrischen Auswertungen quantifiziert werden. Diese Ansätze unterstützen sowohl mechanistische enzymologische Studien als auch Hochdurchsatz-Screening-Anwendungen zur Identifizierung von Inhibitoren.

Häufige Assay-Formate

HAT-Assays sind in verschiedenen Formaten erhältlich, darunter radiometrische, fluoreszierende und kolorimetrische Systeme.

• Radiometrische Assays: Werden oft als Referenzmethode betrachtet, da sie den Acetyltransfer direkt mit markiertem Acetyl-CoA messen und dabei eine hohe Empfindlichkeit und Spezifität bieten.
• Fluoreszenz-Assays: Ermöglichen eine schnelle und empfindliche Erkennung ohne den Einsatz radioaktiver Materialien und sind mit automatisierten Laborabläufen kompatibel.
• Kolorimetrische Assays: Werden häufig in Routine-Laboranwendungen aufgrund ihrer Einfachheit und Kompatibilität mit 96-Well-Plattenformaten für ein effizientes Screening von Verbindungen verwendet.