NeoPRO Pico PLUS Western-ECL-Substrat

Das NeoPRO Pico PLUS Western ECL Substrat ist ein zweikomponentiges chemilumineszierendes Substrat für das Western Blotting und den HRP-basierten Proteinnachweis. Es bietet ein Nachweisniveau im mittleren Femtogramm-Bereich und kombiniert hohe Empfindlichkeit mit einem breiten linearen dynamischen Bereich für den Nachweis und die Quantifizierung von Proteinzielen sowohl geringer als auch hoher Abundanz.

Das Substrat basiert auf einem Luminol-abgeleiteten chemilumineszierenden Nachweissystem. Während des Nachweises katalysiert Meerrettichperoxidase (HRP) die Oxidation des Luminolderivats, wobei Licht bei ca. 425 nm erzeugt wird. In die Formulierung integrierte Enhancerkomponenten erhöhen die Intensität und Dauer des chemilumineszierenden Signals.

Das NeoPRO Pico PLUS Western ECL Substrat wird als Kit aus zwei Lösungen geliefert, das eine Luminolderivat-/Enhancer-Lösung und eine Peroxidlösung enthält. Die beiden Lösungen werden unmittelbar vor der Verwendung im Verhältnis 1:1 gemischt, um die Arbeitslösung herzustellen.

Seine hohe Empfindlichkeit, der breite lineare dynamische Bereich und die extrem lange Signaldauer machen es zu einem vielseitigen Substrat für Western-Blot-Experimente, die einen zuverlässigen Nachweis von Proteinen mit unterschiedlichen Abundanzniveaus erfordern. Die Formulierung ist so konzipiert, dass sie weniger Optimierung erfordert und gleichzeitig eine genaue chemilumineszierende Signalerfassung mithilfe von Bildgebungssystemen oder Autoradiographie-Film unterstützt.

• Zweikomponentiges chemilumineszierendes Substrat für das Western Blotting
• Entwickelt für den Proteinnachweis im mittleren Femtogramm-Bereich
• Hohe Empfindlichkeit zum Nachweis von Proteinzielen geringer Abundanz
• Breiter linearer dynamischer Bereich für die Analyse von Proteinen geringer und hoher Abundanz
• Geeignet für eine präzise quantitative Western-Blot-Analyse
• Extrem lange chemilumineszierende Signaldauer
• Vielseitige Formulierung, die weniger Assay-Optimierung erfordert
• HRP-abhängiger chemilumineszierender Nachweis
• Luminolderivat-/Enhancer- und Peroxidlösung separat geliefert
• Arbeitslösung wird durch Mischen der beiden Komponenten im Verhältnis 1:1 hergestellt
• Kompatibel mit HRP-konjugierten Sekundärantikörpern
• Kompatibel mit Nitrocellulose- und PVDF-Western-Blot-Membranen
• Geeignet für Chemilumineszenz-Bildgebungssysteme und Autoradiographie-Filme
• Empfohlene Primärantikörper-Verdünnung: 1:1.000–1:15.000
• Empfohlene Sekundärantikörper-Verdünnung: 1:25.000–1:150.000
• Nur für Forschungszwecke

1. Arbeitslösung vorbereiten: Mischen Sie gleiche Volumina von Lösung A und Lösung B unmittelbar vor der Verwendung im Verhältnis 1:1. Bereiten Sie nur das für die Membran erforderliche Volumen vor.
2. Kreuzkontamination vermeiden: Verwenden Sie für jede Stammlösung separate, saubere Pipettenspitzen. Geben Sie weder Lösung A in Lösung B noch Lösung B in Lösung A.
3. Membran vorbereiten: Nach der Inkubation mit dem Primärantikörper und dem HRP-konjugierten Sekundärantikörper die Membran gründlich mit TBS-T-Puffer waschen.
4. Vor dem Nachweis spülen: Nehmen Sie die Membran aus der Waschschale, spülen Sie sie zweimal mit TBS-T und halten Sie sie feucht, bis das Substrat aufgetragen wird.
5. Überschüssigen Puffer entfernen: Lassen Sie überschüssigen Puffer von einer Ecke der Membran abtropfen, ohne dass die Membran austrocknet.
6. Substrat auftragen: Tragen Sie ca. 0,1 ml vorbereitete NeoPRO Pico PLUS Arbeitslösung pro cm² Membran auf.
7. Inkubieren: Platzieren Sie die Membran mit der Proteinseite nach oben und stellen Sie sicher, dass die Arbeitslösung die Membranoberfläche vollständig bedeckt. Ca. 1,5 Minuten inkubieren.
8. Signal erfassen: Detektieren Sie das chemilumineszierende Signal mit einem kompatiblen Bildgebungsgerät oder Autoradiographie-Film.
9. Belichtung optimieren: Wenn die zu erwartende Signalintensität unbekannt ist, können initiale Belichtungszeiten von 15 Sekunden, 30 Sekunden, 1 Minute und 5 Minuten getestet werden.
10. Antikörperverdünnungen optimieren: Passen Sie die Konzentrationen der Primär- und Sekundärantikörper bei Bedarf an, um ein starkes spezifisches Signal bei minimalem Hintergrund zu erhalten.