NeoPRO Femto PLUS Western-ECL-Substrat

Das NeoPRO Femto PLUS Western ECL Substrat ist ein zweikomponentiges Chemilumineszenz-Substrat für Western-Blotting und HRP-basierte Proteindetektion. Es bietet einen Nachweisbereich im niedrigen Femtogramm-Bereich und eignet sich besonders für den Nachweis sehr geringer Proteinmengen und Ziele mit niedriger Abundanz.

Das Substrat basiert auf einem Luminol-basierten Chemilumineszenz-Detektionssystem. Während der Detektion katalysiert Meerrettichperoxidase die Oxidation des Luminol-Derivats, wodurch Licht bei ca. 425 nm erzeugt wird. In die Formulierung eingearbeitete Verstärkerkomponenten erhöhen die Intensität des Chemilumineszenz-Signals.

Das NeoPRO Femto PLUS Western ECL Substrat kombiniert ultrahohe Empfindlichkeit mit exzellenter Signalintensität und einem breiten linearen dynamischen Bereich. Dies unterstützt die quantitative Western-Blot-Analyse und ermöglicht gleichzeitig stark verdünnte Antikörper sowie einen geringeren Verbrauch wertvoller Reagenzien.

Das Produkt wird als Kit aus zwei Lösungen geliefert, das eine Luminol-Derivat-/Verstärkerlösung und eine Peroxidlösung enthält. Die beiden Komponenten werden unmittelbar vor der Anwendung im Verhältnis 1:1 gemischt, um die Arbeitslösung herzustellen.

• Zweikomponentiges Chemilumineszenz-Substrat für Western-Blotting
• Entwickelt für die Proteindetektion im niedrigen Femtogramm-Bereich
• Ultrahohe Empfindlichkeit für Proteingehaste mit sehr geringer Abundanz
• Exzellente Chemilumineszenz-Signalintensität
• Geeignet für den Nachweis sehr geringer Proteinmengen
• Breiter linearer dynamischer Bereich für quantitative Western-Blot-Analysen
• Unterstützt die Verwendung stark verdünnter Antikörper
• Kann den Verbrauch wertvoller primärer und sekundärer Antikörper reduzieren
• HRP-abhängige Chemilumineszenz-Detektion
• Luminol-Derivat-/Verstärkerlösung und Peroxidlösung separat geliefert
• Arbeitslösung wird durch Mischen der beiden Komponenten im Verhältnis 1:1 hergestellt
• Kompatibel mit HRP-konjugierten Sekundärantikörpern
• Kompatibel mit Nitrocellulose- und PVDF-Western-Blot-Membranen
• Geeignet für Chemilumineszenz-Bildgebungssysteme und Autoradiographie-Filme
• Empfohlene Verdünnung des Primärantikörpers: 1:5.000–1:100.000
• Empfohlene Verdünnung des Sekundärantikörpers: 1:100.000–1:500.000
• Nur für Forschungszwecke

1. Arbeitslösung vorbereiten: Mischen Sie gleiche Volumina von Lösung A und Lösung B unmittelbar vor der Verwendung im Verhältnis 1:1.
2. Kreuzkontamination vermeiden: Verwenden Sie für jede Stammlösung separate, saubere Pipettenspitzen. Bringen Sie Lösung A nicht in Lösung B und Lösung B nicht in Lösung A ein.
3. Membran vorbereiten: Nach der Inkubation mit dem Primärantikörper und dem HRP-konjugierten Sekundärantikörper die Membran gründlich mit TBS-T-Puffer waschen.
4. Vor der Detektion spülen: Nehmen Sie die Membran aus ihrer Schale, spülen Sie sie zweimal mit TBS-T und halten Sie sie feucht, bis das Substrat aufgetragen wird.
5. Überschüssigen Puffer entfernen: Lassen Sie überschüssigen Puffer von einer Ecke der Membran ablaufen, ohne dass die Membran austrocknet.
6. Substrat auftragen: Tragen Sie ca. 0,1 mL der vorbereiteten NeoPRO Femto PLUS Arbeitslösung pro cm² Membran auf.
7. Inkubieren: Platzieren Sie die Membran mit der Proteinseite nach oben und stellen Sie sicher, dass die Arbeitslösung die Membranoberfläche vollständig bedeckt. Etwa 1,5 Minuten inkubieren.
8. Signal erfassen: Detektieren Sie das Chemilumineszenz-Signal mit einem kompatiblen Bildgebungsgerät oder Autoradiographie-Film.
9. Belichtung optimieren: Wenn die erwartete Signalintensität unbekannt ist, können initiale Belichtungszeiten von 15 Sekunden, 30 Sekunden, 1 Minute und 5 Minuten getestet werden.
10. Antikörperverdünnungen optimieren: Aufgrund der ultrahohen Empfindlichkeit des Substrats sollten die Antikörper ausreichend verdünnt werden, um ein spezifisches Signal zu erhalten und gleichzeitig Hintergrund und Sättigung zu begrenzen.