Sustrato NeoPRO Femto PLUS Western ECL

El sustrato ECL para Western blot NeoPRO Femto PLUS es un sustrato quimioluminiscente de dos componentes diseñado para Western blotting y detección de proteínas basada en HRP. Proporciona un nivel de detección de femtogramos bajos y es especialmente adecuado para detectar cantidades muy bajas de proteínas y dianas de baja abundancia.

El sustrato se basa en un sistema de detección quimioluminiscente derivado del luminol. Durante la detección, la peroxidasa de rábano picante cataliza la oxidación del derivado de luminol, produciendo luz a aproximadamente 425 nm. Los componentes potenciadores incorporados en la formulación aumentan la intensidad de la señal quimioluminiscente.

El sustrato ECL para Western blot NeoPRO Femto PLUS combina una sensibilidad ultraalta con una excelente intensidad de señal y un amplio rango dinámico lineal. Esto favorece el análisis cuantitativo por Western blot a la vez que permite utilizar anticuerpos muy diluidos y reducir el consumo de reactivos valiosos.

El producto se suministra como un kit de dos soluciones que contiene una solución de derivado de luminol/potenciador y una solución de peróxido. Los dos componentes se mezclan en una proporción de 1:1 inmediatamente antes de su uso para preparar la solución de trabajo.

• Sustrato quimioluminiscente de dos componentes para Western blotting
• Diseñado para la detección de proteínas en el rango de femtogramos bajos
• Sensibilidad ultraalta para dianas proteicas de muy baja abundancia
• Excelente intensidad de señal quimioluminiscente
• Adecuado para la detección de cantidades muy bajas de proteínas
• Amplio rango dinámico lineal para análisis cuantitativos por Western blot
• Compatible con el uso de anticuerpos muy diluidos
• Puede reducir el consumo de anticuerpos primarios y secundarios valiosos
• Detección quimioluminiscente dependiente de HRP
• Solución de derivado de luminol/potenciador y solución de peróxido suministradas por separado
• Solución de trabajo preparada mezclando los dos componentes en una proporción de 1:1
• Compatible con anticuerpos secundarios conjugados con HRP
• Compatible con membranas de nitrocelulosa y PVDF para Western blot
• Adecuado para sistemas de imagen de quimioluminiscencia y películas de autorradiografía
• Dilución recomendada del anticuerpo primario: 1:5.000–1:100.000
• Dilución recomendada del anticuerpo secundario: 1:100.000–1:500.000
• Solo para uso en investigación

1. Preparar la solución de trabajo: Mezclar volúmenes iguales de la Solución A y la Solución B en una proporción de 1:1 inmediatamente antes de su uso.
2. Evitar la contaminación cruzada: Utilizar puntas de pipeta limpias y separadas para cada solución de stock. No introducir la Solución A en la Solución B ni la Solución B en la Solución A.
3. Preparar la membrana: Tras la incubación con el anticuerpo primario y el anticuerpo secundario conjugado con HRP, lavar la membrana minuciosamente con tampón TBS-T.
4. Enjuagar antes de la detección: Retirar la membrana de su bandeja, enjuagarla dos veces con TBS-T y mantenerla húmeda hasta aplicar el sustrato.
5. Eliminar el exceso de tampón: Permitir que el exceso de tampón drene desde una esquina de la membrana sin permitir que esta se seque.
6. Aplicar el sustrato: Aplicar aproximadamente 0,1 mL de la solución de trabajo NeoPRO Femto PLUS preparada por cm² de membrana.
7. Incubar: Colocar la membrana con el lado de las proteínas hacia arriba y asegurarse de que la solución de trabajo cubra por completo la superficie de la membrana. Incubar durante aproximadamente 1,5 minutos.
8. Adquirir la señal: Detectar la señal quimioluminiscente utilizando un dispositivo de imagen compatible o una película de autorradiografía.
9. Optimizar la exposición: Cuando se desconozca la intensidad de señal esperada, se pueden probar tiempos de exposición iniciales de 15 segundos, 30 segundos, 1 minuto y 5 minutos.
10. Optimizar las diluciones de anticuerpos: Debido a la sensibilidad ultraalta del sustrato, diluir los anticuerpos de forma suficiente para obtener una señal específica mientras se limitan el fondo y la saturación.