Anticorpi primari anti-cavallo coniugati con alloficocianina (APC) sono immunoreagenti fluorescenti nel rosso lontano ottimizzati per applicazioni di citometria a flusso che richiedono eccitazione con laser rosso. Vengono prodotti immunizzando ospiti come capra o coniglio con immunoglobuline di cavallo purificate, vengono purificati per affinità e coniugati con APC, una ficobiliproteina di 105 kDa derivata da cianobatteri con massimi di eccitazione ed emissione rispettivamente di 650 nm e 660 nm. L’APC presenta una luminosità eccezionale, con un elevato coefficiente di estinzione molare (≈ 7,0 × 10⁵ M⁻¹cm⁻¹) e una resa quantica di circa 0,68, consentendo la rilevazione sensibile di antigeni equini espressi a densità molto basse. La sua emissione nel rosso lontano minimizza la sovrapposizione spettrale con FITC e PE, rendendo l’APC particolarmente adatto per pannelli di immunofenotipizzazione multicolore. Le specificità disponibili includono reagenti anti-IgG (H+L), anti-sottoclassi di IgG e anti-IgM. La pre-adsorbimento contro immunoglobuline di topo, ratto, coniglio e umane riduce ulteriormente la reattività crociata in campioni sperimentali multi-specie.

Applicazioni

Gli anticorpi anti-cavallo coniugati con APC sono ampiamente utilizzati in citometria a flusso e nella citofluorimetria a flusso con separazione cellulare attivata dalla fluorescenza (FACS), dove la loro elevata intensità di fluorescenza e la compatibilità con laser rossi a 633–647 nm consentono l’immunofenotipizzazione quantitativa delle popolazioni di leucociti equini e la rilevazione sensibile di citochine intracellulari. Negli saggi multiplex basati su beads, l’APC funziona come fluoroforo reporter per la quantificazione di citochine e altri biomarcatori. Questi coniugati sono impiegati anche in microscopia a immunofluorescenza e imaging ad alto contenuto per la localizzazione antigenica in cellule fissate. Lo spettro di emissione nel rosso lontano contribuisce a ridurre l’autofluorescenza tissutale, migliorando così i rapporti segnale-fondo. Le diluizioni di lavoro tipiche per la citometria a flusso variano da 1:50 a 1:500. Questi reagenti sono destinati esclusivamente all’uso nella ricerca e non sono approvati per procedure diagnostiche.