Anticorpi primari anti-cavallo coniugati con Atto sono immunoreagenti fluorescenti progettati per la rilevazione ad alta sensibilità di antigeni equini in applicazioni avanzate basate sulla fluorescenza. Sono prodotti immunizzando specie ospiti come capra o coniglio con immunoglobuline di cavallo purificate, purificati per affinità e coniugati covalentemente a fluorofori Atto — una famiglia di coloranti sintetici riconosciuti per la loro eccezionale luminosità, spettri di emissione stretti e superiore fotostabilità. I fluorofori sono tipicamente attaccati tramite chimiche di estere NHS o maleimmide a residui di lisina o cisteina, utilizzando rapporti di marcatura controllati che preservano l’affinità di legame all’antigene massimizzando al contempo l’intensità di fluorescenza.
Proprietà dei fluorofori Atto
La famiglia di coloranti Atto copre un ampio intervallo spettrale da 390 nm (UV/viola) a 700 nm (vicino infrarosso), con varianti comunemente disponibili per la rilevazione specifica del cavallo che includono Atto 390, Atto 488, Atto 565, Atto 633, Atto 655, Atto 680 e Atto 700. Atto 488 è ampiamente utilizzato come alternativa alla fluoresceina grazie alla sua luminosità e fotostabilità migliorate. Atto 594 offre un’eccellente solubilità in acqua e mantiene un elevato rendimento quantico in un ampio intervallo di pH (2–10). Atto 647N fornisce un’eccezionale intensità di fluorescenza insieme a outstanding stabilità di pH e fotostabilità, rendendolo un’alternativa affidabile a Cy®5 e Alexa Fluor® 647. Per minimizzare il legame non specifico, questi anticorpi sono comunemente pre-adsorbiti contro immunoglobuline di specie correlate, riducendo efficacemente la reattività crociata.
Applicazioni
Gli anticorpi primari anti-cavallo coniugati con Atto sono ampiamente utilizzati in immunoassaggi basati sulla fluorescenza. In immunofluorescenza e microscopia confocale, la loro superiore fotostabilità consente un’acquisizione di immagini prolungata e supporta tecniche di super-risoluzione come la microscopia a deplezione di emissione stimolata (STED), raggiungendo risoluzioni nanometriche di circa 30–50 nm. In citometria a flusso, la loro elevata intensità di fluorescenza facilita la rilevazione di antigeni equini a bassa abbondanza in pannelli multicolore complessi. Questi coniugati sono anche adatti per western blotting, ELISA (frequentemente validati a diluizioni superiori a 1:10.000), screening ad alto contenuto e saggi multiplex basati su biglie. Le diluizioni ottimali di anticorpo devono essere determinate empiricamente per ciascuna applicazione sperimentale. Questi prodotti sono destinati esclusivamente all’uso di ricerca e non sono approvati per procedure diagnostiche.