Anticorpos primários anti-cavalo conjugados com Atto são imunorreativos fluorescentes projetados para a detecção de alta sensibilidade de antígenos equinos em aplicações avançadas baseadas em fluorescência. São produzidos imunizando espécies hospedeiras como cabra ou coelho com imunoglobulinas de cavalo purificadas, purificados por afinidade e conjugados covalentemente a fluoróforos Atto — uma família de corantes sintéticos reconhecidos pela sua excepcional luminosidade, espectros de emissão estreitos e superior fotostabilidade. Os fluoróforos são tipicamente ligados através de químicas de éster NHS ou maleimida a resíduos de lisina ou cisteína, utilizando rácios de marcação controlados que preservam a afinidade de ligação ao antígeno enquanto maximizam a intensidade de fluorescência.
Propriedades dos fluoróforos Atto
A família de corantes Atto cobre uma ampla faixa espectral de 390 nm (UV/violeta) a 700 nm (infravermelho próximo), com variantes comumente disponíveis para detecção específica de cavalo incluindo Atto 390, Atto 488, Atto 565, Atto 633, Atto 655, Atto 680 e Atto 700. Atto 488 é amplamente utilizado como alternativa à fluoresceína devido ao seu brilho e fotostabilidade aprimorados. Atto 594 oferece excelente solubilidade em água e mantém um alto rendimento quântico numa ampla faixa de pH (2–10). Atto 647N fornece intensidade de fluorescência excepcional juntamente com outstanding estabilidade de pH e fotostabilidade, tornando-o uma alternativa fiável ao Cy®5 e Alexa Fluor® 647. Para minimizar a ligação não específica, estes anticorpos são comumente pré-adsorvidos contra imunoglobulinas de espécies relacionadas, reduzindo eficazmente a reatividade cruzada.
Aplicações
Os anticorpos primários anti-cavalo conjugados com Atto são amplamente utilizados em imunoensaios baseados em fluorescência. Em imunofluorescência e microscopia confocal, a sua superior fotostabilidade permite a aquisição de imagens prolongada e suporta técnicas de superresolução como a microscopia de depleção por emissão estimulada (STED), alcançando resoluções nanométricas de aproximadamente 30–50 nm. Em citometria de fluxo, a sua alta intensidade de fluorescência facilita a detecção de antígenos equinos de baixa abundância em painéis multicolores complexos. Estes conjugados também são adequados para western blotting, ELISA (frequentemente validados a diluições superiores a 1:10.000), rastreio de alto conteúdo e ensaios multiplex baseados em esferas. As diluições ótimas de anticorpo devem ser determinadas empiricamente para cada aplicação experimental. Estes produtos destinam-se apenas a uso em investigação e não estão aprovados para procedimentos diagnósticos.