Les inhibiteurs de protéases et de phosphatases sont des réactifs indispensables pour l’extraction protéique, l’étude de la signalisation cellulaire et les analyses biochimiques. Lors de la lyse de cellules ou de tissus, les protéases et phosphatases endogènes peuvent être rapidement activées, entraînant respectivement la dégradation des protéines ou la perte d’informations liées à leur état de phosphorylation. L’ajout de systèmes d’inhibition adaptés permet de préserver l’intégrité des protéines, de maintenir les modifications post-traductionnelles et d’améliorer la fiabilité des applications en aval telles que le Western blot, l’ELISA, l’immunoprécipitation, les tests de kinases, la spectrométrie de masse ou l’étude des interactions protéine-protéine.
Préservation de l’intégrité protéique
Les inhibiteurs de protéases sont conçus pour réduire l’activité des enzymes capables de cliver les protéines, notamment les protéases à sérine, cystéine, aspartate et les métalloprotéases. En limitant la protéolyse pendant la préparation des échantillons, ils contribuent à maintenir la taille, la structure et l’abondance des protéines cibles, ce qui est essentiel pour une détection et une quantification fiables. Les inhibiteurs de phosphatases, quant à eux, empêchent le retrait enzymatique des groupements phosphate des protéines. Cette protection est particulièrement importante pour l’étude des événements de phosphorylation impliqués dans la transduction du signal, le cycle cellulaire, l’apoptose, la différenciation, le métabolisme et d’autres processus cellulaires dynamiques.
Applications et critères de sélection
Le choix des inhibiteurs dépend du type d’échantillon, du tampon d’extraction, de la protéine cible et de l’analyse prévue. Les cocktails d’inhibiteurs de protéases à large spectre sont généralement ajoutés aux tampons de lyse juste avant utilisation afin de limiter la dégradation protéique. Les cocktails d’inhibiteurs de phosphatases sont sélectionnés pour préserver les états de phosphorylation sur les résidus sérine/thréonine et tyrosine. Des formulations combinant inhibiteurs de protéases et de phosphatases sont également utilisées lorsque la stabilité globale des protéines et leur statut de phosphorylation doivent être conservés dans le même lysat. Ces réactifs existent sous plusieurs formats pratiques, notamment solutions liquides, comprimés, capsules et formulations sans EDTA, permettant d’adapter les conditions d’inhibition aux applications impliquant des enzymes dépendantes des métaux, la purification par affinité ou la spectrométrie de masse. Une sélection appropriée des inhibiteurs est donc essentielle pour obtenir des échantillons protéiques de haute qualité et des résultats expérimentaux reproductibles.
Formats courants d’inhibiteurs
- Cocktails d’inhibiteurs de protéases à large spectre
- Cocktails d’inhibiteurs de phosphatases pour protéines phosphorylées
- Mélanges combinés d’inhibiteurs de protéases et de phosphatases
- Formulations sans EDTA
- Formats liquides, comprimés ou capsules pour une préparation pratique
