NeoPRO Femto Western ECL-substraat

Het NeoPRO Femto Western ECL Substraat is een chemiluminescerend substraat met twee componenten dat is ontworpen voor Western blotting en op HRP gebaseerde eiwitdetectie. Het biedt een detectieniveau in het gemiddelde tot lage femtogrambereik en is met name geschikt voor toepassingen die een zeer betrouwbare en gevoelige detectie van eiwitdoelwitten met een lage abundantie vereisen.

Het substraat is gebaseerd op een op luminol afgeleid chemiluminescerend detectiesysteem. Tijdens de detectie katalyseert mierikswortelperoxidase de oxidatie van het luminolderivaat, waarbij licht wordt geproduceerd bij ongeveer 425 nm. In de formulering opgenomen versterkende componenten verhogen de intensiteit en de duur van het chemiluminescente signaal.

Het NeoPRO Femto Western ECL Substraat genereert een sterk chemiluminescerend signaal in de aanwezigheid van een zeer lage achtergrond, wat zorgt voor een hoge signaal-ruisverhouding. De verlengde signaalduur vergemakkelijkt herhaalde beeldacquisitie en optimalisatie van de belichtingsomstandigheden.

Het product wordt geleverd als een kit met twee oplossingen, bestaande uit een luminolderivaat-/versterkingsoplossing en een peroxideoplossing. De twee componenten worden onmiddellijk voor gebruik gemengd in een verhouding van 1:1 om de werkoplossing te bereiden.

• Chemiluminescerend substraat met twee componenten voor Western blotting
• Ontworpen voor eiwitdetectie in het gemiddelde tot lage femtogrambereik
• Zeer hoge gevoeligheid voor eiwitdoelwitten met een lage abundantie
• Sterk chemiluminescerend signaal met een zeer lage achtergrond
• Hoge signaal-ruisverhouding voor duidelijke visualisatie van banden met een lage intensiteit
• Verlengde duur van het chemiluminescente signaal
• HRP-afhankelijke chemiluminescente detectie
• Luminolderivaat-/versterkingsoplossing en peroxideoplossing afzonderlijk geleverd
• Werkoplossing bereid door de twee componenten te mengen in een verhouding van 1:1
• Compatibel met HRP-geconjugeerde secundaire antilichamen
• Compatibel met nitrocellulose- en PVDF Western blot-membranen
• Geschikt voor signaalacquisitie met chemiluminescentie-beeldvormingssystemen of autoradiografiefilm
• Aanbevolen verdunning primair antilichaam: 1:5.000–1:50.000
• Aanbevolen verdunning secundair antilichaam: 1:50.000–1:250.000
• Uitsluitend voor onderzoeksdoeleinden

1. Bereid de werkoplossing: Meng gelijke volumes Oplossing A en Oplossing B in een verhouding van 1: 1 onmiddellijk voor gebruik.
2. Vermijd kruisbesmetting: Gebruik schone, afzonderlijke pipettips voor elke voorraadoplossing. Breng Oplossing A niet in Oplossing B en Oplossing B niet in Oplossing A.
3. Bereid het membraan voor: Was het membraan na de incubatie met het primaire antilichaam en het HRP-geconjugeerde secundaire antilichaam grondig met TBS-T-buffer.
4. Spoel vóór de detectie: Verwijder het membraan uit de wasbak, spoel het tweemaal met TBS-T en houd het vochtig tot het substraat wordt aangebracht.
5. Verwijder overtollige buffer: Laat overtollige buffer van één hoek van het membraan weglopen zonder dat het membraan opdroogt.
6. Breng het substraat aan: Breng ongeveer 0,1 mL bereide NeoPRO Femto-werkoplossing aan per cm² membraan.
7. Incubeer: Plaats het membraan met de eiwitzijde naar boven en zorg ervoor dat de werkoplossing het membraanoppervlak volledig bedekt. Incubeer gedurende ongeveer 1,5 minuut.
8. Verkrijg het signaal: Detecteer het chemiluminescente signaal met behulp van een compatibel beeldvormingsapparaat of autoradiografiefilm.
9. Optimaliseer de belichting: Wanneer de te verwachten signaalintensiteit onbekend is, kunnen initiële belichtingstijden van 15 seconden, 30 seconds, 1 minuut en 5 minuten worden getest.
10. Optimaliseer antilichaamverdunningen: Pas de concentraties van het primaire en secundaire antilichaam aan wanneer dat nodig is om een sterk specifiek signaal met minimale achtergrond te verkrijgen.