NeoPRO Nano Western ECL-substraat

Het NeoPRO Nano Western ECL Substraat is een tweedelig chemiluminescent substraat ontworpen voor Western blotting en op HRP gebaseerde eiwitdetectie. Het biedt een detectieniveau in het midden van het picogrambereik en is bedoeld voor routinematige Western blot-toepassingen waarbij een betrouwbare chemiluminescente detectie van eiwitdoelwitten vereist is.

Het substraat is gebaseerd op een van luminol afgeleid chemiluminescent detectiesysteem. Peroxidase-gekatalyseerde oxidatie genereert licht, terwijl reactiecomponenten die in de formulering zijn verwerkt de signaalintensiteit en -duur verhogen. Dit maakt de detectie mogelijk van eiwitten die na antilichaamincubatie op Western blot-membranen zijn geïmmobiliseerd.

Het NeoPRO Nano Western ECL Substraat wordt geleverd als een kit met twee oplossingen, bestaande uit een luminolderivaat-/versterkeroplossing en een peroxideoplossing. De twee oplossingen worden onmiddellijk vóór gebruik in een verhouding van 1:1 gemengd om de werkoplossing te bereiden.

Het substraat kan worden gebruikt met standaard Western blotting-workflows met SDS-PAGE, membraantransfer, blokkering en detectie met aan HRP geconjugeerde antilichamen. De aanbevolen antilichaamverdunningsbereiken en de gecontroleerde chemiluminescente detectieprocedure bieden een praktich startpunt voor eiwitdetectie in het picogrambereik.

• Tweedelig chemiluminescent substraat voor Western blotting
• Ontworpen voor eiwitdetectie in het midden van het picogrambereik
• Op HRP gebaseerde chemiluminescente detectie
• Luminolderivaat-/versterkeroplossing en peroxideoplossing afzonderlijk geleverd
• Werkoplossing bereid door de twee componenten te mengen in een verhouding van 1:1
• Geschikt voor routinematige Western blot-toepassingen
• Compatibel met aan HRP geconjugeerde secundaire antilichamen
• Geschikt voor de registratie van chemiluminescente signalen met behulp van beeldvormingsapparaten of autoradiografiefilm
• Aanbevolen verdunning primair antilichaam: 1:100–1:5.000
• Aanbevolen verdunning secundair antilichaam: 1:1.000–1:15.000
• Uitsluitend voor onderzoeksdoeleinden

1. De werkoplossing bereiden: Meng Oplossing A en Oplossing B in een verhouding van 1:1 onmiddellijk vóór gebruik.
2. Het membraan voorbereiden: Spoel het membraan na de incubatie met het primaire antilichaam en het aan HRP geconjugeerde secundaire antilichaam tweemaal met TBS-T.
3. Het substraat aanbrengen: Gebruik ongeveer 0,1 mL NeoPRO Nano werkoplossing per cm² membraan.
4. Incuberen: Zorg ervoor dat het gehele membraanoppervlak is bedekt en incubeer gedurende ongeveer 1,5 minuten.
5. Het signaal registreren: Detecteer het chemiluminescente signaal met behulp van een beeldvormingsapparaat of autoradiografiefilm.
6. Belichting optimaliseren: Voor een onbekend signaal kunnen initiële belichtingstijden van 15 seconden, 30 sekunden (seconden), 1 minuut en 5 minuten worden getest.