Substrato NeoPRO Nano Western ECL

O Substrato ECL para Western blot NeoPRO Nano é um substrato quimioluminiscente de dois componentes concebido para Western blotting e deteção de proteínas baseada em HRP. Oferece um nível de deteção de picogramas médios e destina-se a aplicações de rotina de Western blot em que é necessária uma deteção quimioluminiscente fiável de alvos proteicos.

O substrato baseia-se num sistema de deteção quimioluminiscente derivado do luminol. A oxidação catalisada por peroxidase gera luz, enquanto os componentes de reação incorporados na formulação aumentam a intensidade e a duração do sinal. Isto permite a deteção de proteínas imobilizadas em membranas de Western blot após a incubação com anticorpos.

O Substrato ECL para Western blot NeoPRO Nano é fornecido como um kit de duas soluções contendo uma solução de derivado de luminol/potenciador e uma solução de peróxido. As duas soluções são misturadas numa proporção de 1:1 imediatamente antes da utilização para preparar a solução de trabalho.

O substrato pode ser utilizado com os fluxos de trabalho padrão de Western blotting que envolvem SDS-PAGE, transferência de membrana, bloqueio e deteção com anticorpos conjugados com HRP. Os intervalos de diluição de anticorpos recomendados e o procedimento de deteção quimioluminiscente controlado fornecem um ponto de partida prático para a deteção de proteínas ao nível de picogramas médios.

• Substrato quimioluminiscente de dois componentes para Western blotting
• Concebido para a deteção de proteínas ao nível de picogramas médios
• Deteção quimioluminiscente dependente de HRP
• Solução de derivado de luminol/potenciador e solução de peróxido fornecidas separadamente
• Solução de trabalho preparada misturando os dois componentes numa proporção de 1:1
• Adequado para aplicações de rotina de Western blot
• Compatível com anticorpos secundários conjugados com HRP
• Adequado para a aquisição de sinais quimioluminiscentes utilizando dispositivos de imagem ou películas de autorradiografia
• Diluição recomendada do anticorpo primário: 1:100–1:5.000
• Diluição recomendada do anticorpo secundário: 1:1.000–1:15.000
• Apenas para uso em investigação

1. Preparar a solução de trabalho: Misturar a Solución A e a Solución B numa proporção de 1:1 imediatamente antes da utilização.
2. Preparar a membrana: Após a incubação com o anticorpo primário e o anticorpo secundário conjugado com HRP, enxaguar a membrana duas vezes com TBS-T.
3. Aplicar o substrato: Utilizar aproximadamente 0,1 mL de solução de trabalho NeoPRO Nano por cm² de membrana.
4. Incubar: Assegurar que toda a superfície da membrana está coberta e incubar durante aproximadamente 1,5 minutos.
5. Adquirir o sinal: Detetar o sinal quimioluminiscente utilizando um dispositivo de imagem ou uma película de autorradiografia.
6. Optimizar a exposição: Para um sinal desconhecido, podem ser testados tempos de exposição iniciais de 15 segundos, 30 segundos, 1 minuto e 5 minutos.