Sustrato NeoPRO Nano Western ECL

El sustrato Western ECL NeoPRO Nano es un sustrato quimioluminiscente de dos componentes diseñado para Western blotting y detección de proteínas basada en HRP. Proporciona un nivel de detección de medio picograma y está destinado a aplicaciones rutinarias de Western blot en las que se requiere una detección quimioluminiscente fiable de dianas proteicas.

El sustrato se basa en un sistema de detección quimioluminiscente derivado del luminol. La oxidación catalizada por peroxidasa genera luz, mientras que los componentes de la reacción incorporados en la formulación aumentan la intensidad y la duración de la señal. Esto permite la detección de proteínas inmovilizadas en membranas de Western blot tras la incubación con anticuerpos.

El sustrato Western ECL NeoPRO Nano se suministra como un kit de dos soluciones que contiene una solución de derivado de luminol/potenciador y una solución de peróxido. Las dos soluciones se mezclan en una proporción de 1:1 inmediatamente antes de su uso para preparar la solución de trabajo.

El sustrato se puede utilizar con los flujos de trabajo estándar de Western blotting que implican SDS-PAGE, transferencia de membrana, bloqueo y detección con anticuerpos conjugados con HRP. Los rangos de dilución de anticuerpos recomendados y el procedimiento de detección quimioluminiscente controlado proporcionan un punto de partida práctico para la detección de proteínas a nivel de picogramos medios.

• Sustrato quimioluminiscente de dos componentes para Western blotting
• Diseñado para la detección de proteínas a nivel de picogramos medios
• Detección quimioluminiscente dependiente de HRP
• Solución de derivado de luminol/potenciador y solución de peróxido suministradas por separado
• Solución de trabajo preparada mezclando los dos componentes en una proporción de 1:1
• Adecuado para aplicaciones rutinarias de Western blot
• Compatible con anticuerpos secundarios conjugados con HRP
• Adecuado para la adquisición de señales quimioluminiscentes mediante dispositivos de imagen o películas de autorradiografía
• Dilución recomendada del anticorpo primario: 1:100–1:5.000
• Dilución recomendada del anticorpo secundario: 1:1.000–1:15.000
• Solo para uso en investigación

1. Preparar la solución de trabajo: Mezclar la Solución A y la Solución B en una proporción de 1:1 inmediatamente antes de su uso.
2. Preparar la membrana: Tras la incubación con el anticuerpo primario y el anticuerpo secundario conjugado con HRP, enjuagar la membrana dos veces con TBS-T.
3. Aplicar el sustrato: Utilizar aproximadamente 0,1 mL de solución de trabajo NeoPRO Nano por cm² de membrana.
4. Incubar: Asegurarse de que toda la superficie de la membrana esté cubierta e incubar durante aproximadamente 1,5 minutos.
5. Adquirir la señal: Detectar el señal quimioluminiscente utilizando un dispositivo de imagen o una película de autorradiografía.
6. Optimizar la exposición: Para una señal desconocida, se pueden probar tiempos de exposición iniciales de 15 segundos, 30 segundos, 1 minuto y 5 minutos.