Substrato NeoPRO Pico Western ECL

O Substrato Western ECL NeoPRO Pico é um substrato quimioluminescente de dois componentes desenvolvido para Western blotting e detecção de proteínas baseada em HRP. Ele fornece um nível de detecção de picograma baixo e é particularmente adequado para a detecção de proteínas-alvo abundantes em experimentos de rotina de Western blot.

O substrato baseia-se em um sistema de detecção quimioluminescente derivado do luminol. Durante a detecção, a peroxidase de rábano catalisa a oxidação do derivado de luminol, produzindo luz a aproximadamente 425 nm. Componentes intensificadores incorporados na formulação aumentam a intensidade e a duração do sinal quimioluminescente.

O Substrato Western ECL NeoPRO Pico é fornecido como um kit de duas soluções contendo uma solução de derivado de luminol/intensificador e uma solução de peróxido. Os dois componentes são misturados na proporção de 1:1 imediatamente antes da aplicação na membrana de Western blot.

Sua emissão de luz estável e sensibilidade de picograma baixo o tornam adequado para a análise rotineira de proteínas altamente expressas. O substrato pode ser usado com fluxos de trabalho padrão de Western blot que envolvem SDS-PAGE, transferência de membrana, bloqueio, incubação com anticorpo primário e detecção com anticorpo secundário conjugado com HRP.

• Substrato quimioluminescente de dois componentes para Western blotting
• Projetado para detecção de proteínas de picograma baixo
• Adequado para proteínas-alvo e amostras abundantes
• Fornece emissão de luz quimioluminescente estável
• Detecção quimioluminescente dependente de HRP
• Solução de derivado de luminol/intensificador e solução de peróxido fornecidas separadamente
• Solução de trabalho preparada misturando os dois componentes na proporção de 1:1
• Adequado para aplicações rotineiras de Western blot
• Compatível com anticorpos secundários conjugados com HRP
• Compatível com membranas de Western blot de nitrocelulose e PVDF
• Adequado para aquisição de sinal usando sistemas de imagem por quimioluminescência ou filme de autorradiografia
• Diluição recomendada do anticorpo primário: 1:500–1:5.000
• Diluição recomendada do anticorpo secundário: 1:20.000–1:100.000
• Apenas para uso em pesquisa

1. Preparar a solução de trabalho: Misture volumes iguais da Solução A e da Solução B na proporção de 1:1 imediatamente antes do uso. Prepare apenas o volume necessário para a membrana.
2. Evitar contaminação cruzada: Use ponteiras de pipeta limpas e separadas para cada solução de estoque. Não introduza a Solução A na Solução B ou vice-versa.
3. Preparar a membrana: Após a incubação com o anticorpo primário e o anticorpo secundário conjugado com HRP, lave a membrana minuciosamente com tampão TBS-T.
4. Enxaguar antes da detecção: Remova a membrana da bandeja de lavagem, enxágue-a duas vezes com TBS-T e mantenha-a úmida até que o substrato seja aplicado.
5. Remover o excesso de tampão: Permita que o excesso de tampão escoe de um canto da membrana sem permitir que a membrana seque.
6. Aplicar o substrato: Aplique aproximadamente 0,1 mL da solução de trabalho NeoPRO Pico preparada por cm² de membrana.
7. Incubar: Coloque a membrana com o lado das proteínas voltado para cima e certifique-se de que a solução de trabalho cubra completamente a superfície da membrana. Incube por aproximadamente 1,5 minuto.
8. Adquirir o sinal: Detecte o sinal quimioluminescente usando um dispositivo de imagem compatível ou filme de autorradiografia.
9. Otimizar a exposição: Quando a intensidade de sinal esperada for desconhecida, tempos de exposição iniciais de 15 segundos, 30 segundos, 1 minuto e 5 minutos podem ser testados.
10. Otimizar as diluições de anticorpos: Ajuste as concentrações dos anticorpos primário e secundário quando necessário para obter um sinal específico forte com fundo mínimo.