NeoPRO Pico PLUS Western ECL Substrate

Le NeoPRO Pico PLUS Western ECL Substrate est un substrat chimiluminescent à deux composants, conçu pour le Western blot et la détection de protéines basée sur la peroxydase de raifort (HRP). Il offre un niveau de détection de l'ordre du femtogramme intermédiaire et allie une haute sensibilité à une large plage dynamique linéaire pour la détection et la quantification de protéines cibles faiblement comme fortement exprimées.

Ce substrat repose sur un système de détection chimiluminescent dérivé du luminol. Lors de la détection, la peroxydase de raifort catalyse l'oxydation du dérivé de luminol, générant une émission lumineuse d'environ 425 nm. Des composants amplificateurs intégrés à la formulation augmentent l'intensité et la durée du signal chimiluminescent.

Le NeoPRO Pico PLUS Western ECL Substrate est fourni sous la forme d'un kit à deux solutions contenant une solution de dérivé de luminol/amplificateur et une solution de peroxyde. Les deux solutions sont mélangées selon un rapport de 1 : 1 immédiatement avant utilisation afin de préparer la solution de travail.

Sa haute sensibilité, sa large plage dynamique linéaire et sa durée de signal exceptionnellement longue en font un substrat polyvalent pour les expériences de Western blot nécessitant une détection fiable de protéines présentant différents niveaux d'expression. Sa formulation est conçue pour nécessiter moins d'optimisation tout en permettant une acquisition précise du signal chimiluminescent à l'aide de systèmes d'imagerie ou de films d'autoradiographie.

• Substrat chimiluminescent à deux composants pour le Western blot
• Conçu pour la détection de protéines au niveau du femtogramme intermédiaire
• Haute sensibilité pour la détection de protéines cibles faiblement exprimées
• Large plage dynamique linéaire pour l'analyse de protéines faiblement et fortement exprimées
• Adapté à l'analyse quantitative précise par Western blot
• Durée de signal chimiluminescent exceptionnellement longue
• Formulation polyvalente nécessitant moins d'optimisation expérimentale
• Détection chimiluminescente dépendante de la HRP
• Solutions de dérivé de luminol/amplificateur et de peroxyde fournies séparément
• Solution de travail préparée par mélange des deux composants selon un rapport 1 : 1
• Compatible avec les anticorps secondaires conjugués à la HRP
• Compatible avec les membranes de Western blot en nitrocellulose et en PVDF
• Compatible avec les systèmes d'imagerie par chimiluminescence et les films d'autoradiographie
• Dilution recommandée de l'anticorps primaire : 1 : 1 000 à 1 : 15 000
• Dilution recommandée de l'anticorps secondaire : 1 : 25 000 à 1 : 150 000
• Réservé à un usage de recherche uniquement

1. Préparer la solution de travail : Mélanger des volumes égaux de la Solution A et de la Solution B selon un rapport 1 : 1 immédiatement avant utilisation. Préparer uniquement le volume nécessaire pour la membrane.
2. Éviter la contamination croisée : Utiliser des embouts de pipette propres et séparés pour chaque solution mère. Ne pas introduire la Solution A dans la Solution B ni la Solution B dans la Solution A.
3. Préparer la membrane : Après l'incubation des anticorps primaire et secondaire conjugué à la HRP, laver la membrane abondamment avec du tampon TBS-T.
4. Rincer avant la détection : Retirer la membrane du bac de lavage, la rincer deux fois avec du TBS-T et la maintenir humide jusqu'à l'application du substrat.
5. Éliminer l'excès de tampon : Laisser l'excès de tampon s'écouler par un coin de la membrane sans laisser celle-ci sécher.
6. Appliquer le substrat : Appliquer environ 0,1 mL de solution de travail NeoPRO Pico PLUS préparée par cm² de membrane.
7. Incubation : Placer la membrane face protéique vers le haut et s'assurer que la solution de travail recouvre complètement la surface de la membrane. Incuber pendant environ 1,5 minute.
8. Acquérir le signal : Détecter le signal chimiluminescent à l'aide d'un système d'imagerie compatible ou d'un film d'autoradiographie.
9. Optimiser le temps d'exposition : Lorsque l'intensité attendue du signal est inconnue, des temps d'exposition initiaux de 15 secondes, 30 secondes, 1 minute et 5 minutes peuvent être testés.
10. Optimiser les dilutions d'anticorps : Ajuster les concentrations des anticorps primaire et secondaire si nécessaire pour obtenir un signal spécifique fort avec un bruit de fond minimal.