Sustrato NeoPRO Pico PLUS para Western ECL

El Sustrato ECL Western NeoPRO Pico PLUS es un sustrato quimioluminiscente de dos componentes desarrollado para el Western blotting y la detección de proteínas basada en HRP. Ofrece un nivel de detección en el rango de los femtogramas medios y combina una alta sensibilidad con un amplio rango dinámico lineal para la detección y cuantificación de dianas proteicas tanto de baja como de alta abundancia.

El sustrato se basa en un sistema de detección quimioluminiscente derivado del luminol. Durante la detección, la peroxidasa de rábano picante cataliza la oxidación del derivado de luminol, generando luz a aproximadamente 425 nm. Los componentes potenciadores incorporados en la formulación aumentan la intensidad y la duración de la señal quimioluminiscente.

El Sustrato ECL Western NeoPRO Pico PLUS se suministra como un kit de dos soluciones que contiene una solución de derivado de luminol/potenciador y una solución de peróxido. Las dos soluciones se mezclan en una proporción de 1:1 inmediatamente antes de su uso para preparar la solución de trabajo.

Su alta sensibilidad, amplio rango dinámico lineal y duración de señal extremadamente larga lo convierten en un sustrato versátil para experimentos de Western blot que requieren una detección fiable de proteínas con diferentes niveles de abundancia. La formulación está diseñada para requerir menos optimización al tiempo que respalda la adquisición precisa de señales quimioluminiscentes mediante sistemas de imagen o película de autorradiografía.

• Sustrato quimioluminiscente de dos componentes para Western blotting
• Diseñado para la detección de proteínas en el rango de los femtogramas medios
• Alta sensibilidad para la detección de dianas proteicas de baja abundancia
• Amplio rango dinámico lineal para el análisis de proteínas tanto de baja como de alta abundancia
• Adecuado para un análisis cuantitativo preciso de Western blot
• Duración de la señal quimioluminiscente extremadamente larga
• Formulación versátil que requiere menor optimización del ensayo
• Detección quimioluminiscente dependiente de HRP
• Soluciones de derivado de luminol/potenciador y peróxido suministradas por separado
• Solución de trabajo preparada mezclando los dos componentes en una proporción de 1:1
• Compatible con anticuerpos secundarios conjugados con HRP
• Compatible con membranas de nitrocelulosa y PVDF para Western blot
• Adecuado para sistemas de imagen quimioluminiscente y película de autorradiografía
• Dilución de anticuerpo primario recomendada: 1:1.000–1:15.000
• Dilución de anticuerpo secundario recomendada: 1:25.000–1:150.000
• Solo para uso en investigación

1. Preparar la solución de trabajo: Mezcle volúmenes iguales de la Solución A y la Solución B en una proporción de 1:1 inmediatamente antes de su uso. Prepare únicamente el volumen necesario para la membrana.
2. Evitar la contaminación cruzada: Utilice puntas de pipeta limpias y separadas para cada solución madre. No introduzca la Solución A en la Solución B ni la Solución B en la Solución A.
3. Preparar la membrana: Tras la incubación con el anticuerpo primario y el anticuerpo secundario conjugado con HRP, lave la membrana minuciosamente con tampón TBS-T.
4. Enjuagar antes de la detección: Retire la membrana de la cubeta de lavado, enjuáguela dos veces con TBS-T y manténgala húmeda hasta que se aplique el sustrato.
5. Eliminar el exceso de tampón: Permita que el exceso de tampón drene desde una esquina de la membrana sin permitir que la membrana se seque.
6. Aplicar el sustrato: Aplique aproximadamente 0,1 mL de la solución de trabajo NeoPRO Pico PLUS preparada por cm² de membrana.
7. Incubar: Coloque la membrana con el lado de las proteínas hacia arriba y asegúrese de que la solución de trabajo cubra completamente la superficie de la membrana. Incube durante aproximadamente 1,5 minutos.
8. Adquirir la señal: Detecte la señal quimioluminiscente utilizando un dispositivo de imagen compatible o una película de autorradiografía.
9. Optimizar la exposición: Cuando se desconozca la intensidad de la señal esperada, se pueden probar tiempos de exposición iniciales de 15 segundos, 30 segundos, 1 minuto y 5 minutos.
10. Optimizar las diluciones de anticuerpos: Ajuste las concentraciones de los anticuerpos primario y secundario cuando sea necesario para obtener una señal específica fuerte con un fondo mínimo.