Les anticorps primaires anti-cobaye conjugués à la Cyanine 5 (Cy5) sont des immunoréactifs fluorescents émettant dans le rouge lointain, conçus pour la détection sensible des antigènes de cobaye dans les essais basés sur la fluorescence. Avec un maximum d'excitation de 649–650 nm et un maximum d'émission d'environ 670 nm, la Cy5 assure une excellente séparation spectrale vis-à-vis de fluorophores tels que le FITC et la Cy3, ce qui en fait un choix idéal pour l'imagerie en fluorescence multiplex et les protocoles avancés d'immunodétection.
Caractéristiques de fluorescence
La Cy5 produit une fluorescence intense dans le rouge lointain, caractérisée par une faible autofluorescence de fond et une grande sensibilité. Elle est efficacement excitée aussi bien par les lasers krypton/argon de 647 nm que par les lasers hélium-néon de 633 nm, garantissant une large compatibilité avec les microscopes confocaux, les cytomètres en flux et les systèmes d'imagerie par fluorescence.
Formats d'anticorps et spécificité
- Anticorps IgG entiers : Les immunoglobulines purifiées intactes conservent les deux régions Fab de liaison à l'antigène ainsi que le domaine Fc, offrant une forte affinité et des performances fiables dans les applications d'immunodétection.
- Anticorps adsorbés de manière croisée : Disponibles sous forme pré-adsorbée contre les protéines sériques de plusieurs espèces afin de réduire les liaisons non spécifiques et la réactivité croisée lors des expériences multiplex.
- Haute spécificité : Validés par immunoélectrophorèse et ELISA pour la reconnaissance des IgG de cobaye, avec une réactivité négligeable envers les protéines sériques non immunoglobuliniques.
Applications et avantages
- Fluorescence multiplex : L'émission dans le rouge lointain permet une détection simultanée avec le FITC, la Cy3, l'Alexa Fluor® 488 et d'autres fluorophores, avec un chevauchement spectral minimal.
- Large compatibilité d'applications : Validés pour l'immunofluorescence (IF), l'immunohistochimie sur tissus inclus en paraffine (IHC-P) et sur coupes congelées (IHC-F), l'immunocytochimie (ICC), la cytométrie en flux (FCM) et la microscopie à fluorescence.
- Performances démontrées en recherche : Utilisés avec succès pour la cartographie d'épitopes sur micropuces peptidiques (peptide microarrays) ainsi que dans d'autres plateformes de détection par fluorescence nécessitant une sensibilité élevée et un faible bruit de fond.
- Optimisation flexible : Les dilutions de travail recommandées se situent généralement entre 1:20 et 1:500, selon le type d'échantillon, l'abondance de l'antigène et les conditions d'acquisition des images.