Nicotinamida adenina dinucleótido (NAD) y su forma reducida (NADH) son nucleótidos de piridina esenciales en el metabolismo intermedio. Funcionan como transportadores clave de electrones en las reacciones redox, impulsando procesos como la glucólisis, el ciclo del ácido tricarboxílico (ciclo TCA) y la fosforilación oxidativa. La medición precisa de los niveles de NAD y NADH es crucial para entender el estado energético celular, el equilibrio redox y la regulación metabólica.

Rol de NAD/NADH en el Metabolismo

• Reacciones Redox: NAD⁺ acepta electrones para convertirse en NADH durante reacciones catabólicas, incluida la glucólisis y el ciclo TCA. Luego, NADH dona electrones a la cadena de transporte de electrones, facilitando la producción de ATP.
• Regulación Metabólica: La relación NAD⁺/NADH refleja el estado redox de la célula e influye en varias vías metabólicas, incluidas aquellas que involucran sirtuinas y ADP-ribosilación.
• Compartimentalización: El transporte de equivalentes reductores entre compartimentos celulares, como el malato-aspartato, vincula el metabolismo citosólico y mitocondrial.

Principio de los Kits de Ensayo de NAD/NADH

• Ciclado enzimático: El NAD⁺ se reduce a NADH, que luego reacciona con una sonda colorimétrica o fluorométrica, produciendo una señal detectable. La intensidad de esta señal es proporcional a la cantidad de NAD⁺ o NADH presente.
• Diferenciación de NAD⁺ y NADH: La extracción con ácido o base degrada selectivamente una forma, permitiendo la cuantificación separada de NAD⁺ y NADH en la misma muestra.
• Detección: Los ensayos colorimétricos se leen típicamente a 450–565 nm, mientras que los ensayos fluorométricos utilizan longitudes de onda de excitación/emisión apropiadas (por ejemplo, 530/585 nm).

Aplicaciones

• Monitoreo del estado energético celular y el estado redox.
• Evaluación de los efectos de fármacos sobre el metabolismo de NAD/NADH.
• Estudio de enfermedades metabólicas, envejecimiento y función mitocondrial.

Los kits de ensayo de NAD/NADH son herramientas indispensables para cuantificar estos intermediarios metabólicos centrales, lo que permite a los investigadores investigar el metabolismo energético, la biología redox y los mecanismos de enfermedades con alta sensibilidad y especificidad.