Membranas de nitrocelulosa son membranas porosas compuestas de nitrocelulosa (o, en algunas formulaciones comerciales, de una matriz de ésteres mixtos de celulosa), utilizadas como soporte sólido para la inmovilización de proteínas, glicoproteínas y ácidos nucleicos. Introducidas por primera vez para la técnica de transferencia de proteínas (protein blotting) en 1967, las membranas de nitrocelulosa siguen siendo una de las matrices de transferencia más utilizadas en la actualidad.
Propiedades y mecanismo de unión
La unión de las proteínas a la nitrocelulosa se produce principalmente mediante una combinación de interacciones hidrofóbicas y electrostáticas. Esta unión se describe como instantánea y prácticamente irreversible, con una capacidad de unión cuantitativa generalmente situada entre 80 y 100 µg/cm². Como ejemplo comercial, la membrana Immobilon-NC de Merck, basada en una matriz de ésteres mixtos de celulosa, está disponible en un formato hidrofílico con un tamaño de poro de 0,45 µm y presenta capacidades de adsorción documentadas de aproximadamente 117 µg/cm² para insulina, 160 µg/cm² para BSA y 259 µg/cm² para IgG de cabra. La nitrocelulosa se humedece fácilmente con agua o tampón de transferencia y es compatible con métodos de detección colorimétricos, quimioluminiscentes y con la mayoría de los métodos fluorescentes. Una limitación reconocida es que la nitrocelulosa sin soporte es inherentemente frágil; las membranas de nitrocelulosa con soporte, construidas sobre una estructura inerte, ofrecen una mayor resistencia mecánica y pueden someterse a reprocesamiento y esterilización en autoclave a 121 °C. La nitrocelulosa también es soluble en disolventes orgánicos como el metanol y la acetona, por lo que la exposición a estos disolventes debe limitarse para preservar la integridad de la membrana.
Aplicaciones
Las membranas de nitrocelulosa se utilizan como soporte sólido en técnicas de transferencia de proteínas y ácidos nucleicos, incluyendo Western blot, Northern blot y Southern blot, así como en procedimientos de transferencia de colonias y placas. En particular, en la técnica de Western blot son muy apreciadas por su alta afinidad de unión hacia proteínas de bajo y mediano peso molecular, su bajo nivel de ruido de fondo y su compatibilidad con múltiples métodos de detección, generalmente a un costo relativamente bajo. En comparación con las membranas de PVDF, las membranas de nitrocelulosa suelen ofrecer una mejor relación señal-ruido en la detección por fluorescencia, mientras que las membranas de PVDF tienden a producir señales quimioluminiscentes más intensas y una mayor sensibilidad para proteínas de baja abundancia. En general, la nitrocelulosa se considera menos adecuada para aplicaciones de transferencia de ácidos nucleicos, como el análisis de ARN mediante blotting, ya que las condiciones de alta concentración salina que favorecen la unión de proteínas pueden interferir con las interacciones dependientes de la carga necesarias para la retención de los ácidos nucleicos.
