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NeoProof ADN polimerasa

 Descripción

  • NeoProof ADN polimerasa NB-60-0006 : una enzima recombinante de alta fidelidad y excelente rendimiento en PCR.
  • Incluye corrección de exonucleasas 3'→5' para mejorar la precisión.
  • Amplifica eficazmente productos de PCR más largos (≤10 kb) y permite la mutagénesis dirigida al sitio.
  • Recomendado para la clonación rutinaria.
  • Tasa de error comparable a la de las Pfu y Kod ADN polimerasas, pero significativamente inferior a la de las Taq ADN polimerasas.
                      

 

Componentes del producto y almacenamiento

  • Se suministra con un tampón de reacción 10× y una solución estabilizadora 5×.
  • Conservación recomendada a -20 °C en congelador a temperatura constante
  • Estabilidad hasta la fecha de caducidad si se almacena como se especifica
  • Definición de la unidad: incorporación de 10 nmoles de dNTPs en 30 minutos a 72 °C

 

Protocolo PCR

  • Protocolo estándar proporcionado como pauta general para la amplificación PCR
  • Directrices para la preparación de la reacción, incluido el orden de los componentes y el montaje en hielo
  • Parámetros de los ciclos de desnaturalización, recocido y extensión
  • Electroforesis en gel para analizar los productos de la PCR

 

Consideraciones sobre el diseño de la PCR

  • Diseño de cebadores PCR con la longitud adecuada (15-30 bases)
  • Recomendaciones sobre secuencias de cebadores para mejorar el rendimiento de la PCR y evitar la degradación
  • Directrices para el contenido de GC de los cebadores y para evitar la estructura secundaria interna
  • Recomendaciones para evitar la formación de dímeros de cebadores y el recocido inespecífico de cebadores
  • Importancia de temperaturas de fusión (Tm) similares para ambos cebadores

 

Plantilla de ADN

  • Cantidades recomendadas de material de partida en función de la calidad y la complejidad
  • Directrices para el uso de plantillas de ADN genómico y plantillas de reacción de síntesis de ADNc
  • Precaución de no sobrepasar el 10% del volumen final de la reacción PCR para las plantillas de ADNc

 

Concentración de enzimas

  • Concentración de enzima recomendada de 1,25 U (0,5 μL) en una reacción de 50 μL.
  • Mayores volúmenes de enzima (hasta 2,5 U) para amplificar plantillas abundantes (>50 ng de ADNg)
  • Opciones de dilución para mayor comodidad durante el montaje de la PCR

 

Ensayos de control de calidad

  • Evaluación de la pureza mediante SDS-PAGE y tinción con azul de Coomassie
  • Evaluación de la contaminación por ADN genómico mediante PCR
  • Ensayos con nucleasas para comprobar la existencia de mellas o cortes en los ácidos nucleicos
  • Ensayo funcional utilizando fragmentos de ADN de diferentes tamaños a partir de ADN genómico humano