NeoTaqII ADN polimerasa

Condiciones de almacenamiento

• Todos los componentes deben almacenarse a -20°C en un congelador sin ciclos de descongelación para garantizar una vida útil máxima.
• La enzima permanece estable a 4°C o a temperatura ambiente hasta 3 días sin comprometer su estabilidad.
• El producto permanecerá estable hasta la fecha de caducidad si se almacena como se especifica.

Definición de la unidad

• Una unidad de la enzima se define como la cantidad necesaria para catalizar la incorporación de 10 nmoles de dNTPs en material insoluble en ácido en 30 minutos a 72 °C en condiciones de ensayo controladas.

Concentración de enzimas

• La concentración de enzima es de 5 U/μL, disuelta en glicerol.

Solución de cloruro de magnesio

• Una solución de MgCl2 50 mM suministrada permite a los usuarios optimizar la concentración de Mg2+ en las configuraciones de PCR.
• Una concentración de 2,5 mM MgCl2 es generalmente eficaz con la ADN polimerasa Taq II de Neo Biotech.
• Después de la descongelación, agitar la solución de MgCl2.

Diseño de cebadores

• Los cebadores de la PCR deben tener entre 15 y 30 bases y flanquear la región de interés.
• Los cebadores deben contener un 40-60% de GC y evitar secuencias que puedan producir una estructura secundaria interna.
• Los extremos 3'de los cebadores no deben ser complementarios para evitar la formación de dímeros de cebadores.
• Evite tres nucleótidos G o C consecutivos cerca del extremo 3' para evitar el recocido inespecífico del cebador.
• Lo ideal es que ambos cebadores tengan temperaturas de fusión (Tm) casi idénticas para un recocido eficaz.

Plantilla de ADN

• La cantidad recomendada de molde de ADN genómico es de 10 ng a 500 ng, pero pueden utilizarse cantidades tan pequeñas como 5 pg.
• Cantidades inferiores pueden ser suficientes para la amplificación de ADN menos complejo (1-20 ng).
• Cuando utilice ADNc de síntesis como molde, no exceda el 10% del volumen final de la reacción de PCR.

Ensayos de control de calidad

• Se comprueba la pureza de la ADN polimerasa Taq II, con una pureza >90% determinada por electroforesis en gel de poliacrilamida SDS y tinción con azul de Coomassie.
• La contaminación por ADN genómico se evalúa mediante PCR y no debe ser detectable.

Ensayos de nucleasas

• Los ensayos de nucleasas se realizan utilizando ADN plasmídico pNZY28 y ADN polimerasa Taq II de Neo Biotech, seguidos de visualización en un gel de agarosa teñido con GreenSafe Premium.
• No debe observarse ningún corte visible del ácido nucleico. Se realizan pruebas similares con el tampón de reacción y la solución de MgCl2.

Ensayo funcional

• El rendimiento de la ADN polimerasa Taq II ha sido ampliamente probado en la amplificación por PCR de fragmentos de ADN de diferentes tamaños a partir de ADN genómico humano.
• Los productos de PCR resultantes deben aparecer como bandas únicas en una agarosa teñida.