Sustrato NeoPRO Pico Western ECL

El Sustrato Western ECL NeoPRO Pico es un sustrato quimioluminiscente de dos componentes desarrollado para Western blotting y detección de proteínas basada en HRP. Proporciona un nivel de detección de bajo picograma y es especialmente adecuado para detectar dianas proteicas abundantes en experimentos rutinarios de Western blot.

El sustrato se basa en un sistema de detección quimioluminiscente derivado del luminol. Durante la detección, la peroxidasa de rábano picante cataliza la oxidación del derivado de luminol, produciendo luz a aproximadamente 425 nm. Los componentes potenciadores incorporados en la formulación aumentan la intensidad y la duración de la señal quimioluminiscente.

El Sustrato Western ECL NeoPRO Pico se suministra como un kit de dos soluciones que contiene una solución de derivado de luminol/potenciador y una solución de peróxido. Los dos componentes se mezclan en una proporción de 1:1 inmediatamente antes de su aplicación en la membrana de Western blot.

Su emisión de luz estable y su sensibilidad de bajo picograma lo hacen adecuado para el análisis rutinario de proteínas altamente expresadas. El sustrato se puede utilizar con los flujos de trabajo estándar de Western blot que implican SDS-PAGE, transferencia de membrana, bloqueo, incubación con anticuerpos primarios y detección con anticuerpos secundarios conjugados con HRP.

• Sustrato quimioluminiscente de dos componentes para Western blotting
• Diseñado para la detección de proteínas de bajo picograma
• Adecuado para dianas proteicas y muestras abundantes
• Proporciona una emisión de luz quimioluminiscente estable
• Detección quimioluminiscente dependiente de HRP
• Solución de derivado de luminol/potenciador y solución de peróxido suministradas por separado
• Solución de trabajo preparada mezclando los dos componentes en una proporción de 1:1
• Adecuado para aplicaciones rutinarias de Western blot
• Compatible con anticuerpos secundarios conjugados con HRP
• Compatible con membranas de Western blot de nitrocelulosa y PVDF
• Adecuado para la adquisición de señales mediante sistemas de imagen por quimioluminiscencia o películas de autorradiografía
• Dilución recomendada del anticuerpo primario: 1:500–1:5.000
• Dilución recomendada del anticuerpo secundario: 1:20.000–1:100.000
• Solo para uso en investigación

1. Preparar la solución de trabajo: Mezclar volúmenes iguales de Solución A y Solución B en una proporción de 1:1 inmediatamente antes de su uso. Preparar únicamente el volumen necesario para la membrana.
2. Evitar la contaminación cruzada: Utilizar puntas de pipeta limpias y separadas para cada solución madre. No introduzca la Solución A en la Solución B ni viceversa.
3. Preparar la membrana: Tras la incubación con el anticuerpo primario y el anticuerpo secundario conjugado con HRP, lavar la membrana minuciosamente con tampón TBS-T.
4. Enjuagar antes de la detección: Retirar la membrana de la bandeja de lavado, enjuagarla dos veces con TBS-T y mantenerla húmeda hasta que se aplique el sustrato.
5. Eliminar el exceso de tampón: Permitir que el exceso de tampón drene desde una esquina de la membrana sin permitir que la membrana se seque.
6. Aplicar el sustrato: Aplicar aproximadamente 0,1 mL de solución de trabajo NeoPRO Pico preparada por cm² de membrana.
7. Incubar: Colocar la membrana con el lado de las proteínas hacia arriba y asegurarse de que la solución de trabajo cubra por completo la superficie de la membrana. Incubar durante aproximadamente 1,5 minutos.
8. Adquirir la señal: Detectar la señal quimioluminiscente utilizando un dispositivo de imagen compatible o una película de autorradiografía.
9. Optimizar la exposición: Cuando se desconozca la intensidad de la señal esperada, se pueden probar tiempos de exposición iniciales de 15 segundos, 30 segundos, 1 minuto y 5 minutos.
10. Optimizar las diluciones de anticuerpos: Ajustar las concentraciones de los anticuerpos primario y secundario cuando sea necesario para obtener una señal específica fuerte con un fondo mínimo.