Colorantes para microscopía de superresolución
Colorantes CF® para microscopía de superresolución multicolor
Publicaciones recientes en las que se comparan tintes sintéticos para la obtención de imágenes de superresolución han demostrado que los tintes CF® ofrecen el mejor rendimiento para múltiples métodos. El brillo superior, la fotoestabilidad y las propiedades de cambio fotoquímico de ciertos colorantes CF® son ideales para SIM 3D, STORM 3D y otras técnicas de superresolución.
El CF®405M de Biotium ha demostrado ser el colorante fluorescente de longitud de onda corta más brillante y fotoestable para SIM. Varios tintes CF® que abarcan los espectros del rojo visible, rojo lejano e infrarrojo cercano han sido validados para STORM, incluyendo imágenes en tres colores con CF®568, CF®647 y CF®680. Véase Lehmann et al. 2015, y una lista completa de referencias en la página siguiente. Biotium ofrece una amplia selección de anticuerpos marcados con colorantes CF®, incluyendo secundarios de etiquetado único con bajo grado de etiquetado, que según los informes es óptimo para STORM1. También ofrecemos otros conjugados, colorantes reactivos y kits de etiquetado.
El CF®405M de Biotium ha demostrado ser el colorante fluorescente de longitud de onda corta más brillante y fotoestable para SIM. Varios tintes CF® que abarcan los espectros del rojo visible, rojo lejano e infrarrojo cercano han sido validados para STORM, incluyendo imágenes en tres colores con CF®568, CF®647 y CF®680. Véase Lehmann et al. 2015, y una lista completa de referencias en la página siguiente. Biotium ofrece una amplia selección de anticuerpos marcados con colorantes CF®, incluyendo secundarios de etiquetado único con bajo grado de etiquetado, que según los informes es óptimo para STORM1. También ofrecemos otros conjugados, colorantes reactivos y kits de etiquetado.
Figura 1. CF®568 (izquierda) produce mejores imágenes que Cy®3b (derecha) en microscopía STORM 3D.
Las células fijadas se tiñeron con un anticuerpo anti-tubulina de ratón seguido de anticuerpos secundarios anti-ratón conjugados con colorantes. Véanse las condiciones de obtención de imágenes en la leyenda de la figura 2. Las moléculas de colorante se fotoconmutaron y se visualizaron con un láser de 560 nm; se utilizó un láser de 405 nm para ayudar a la reactivación del colorante al estado emisor.
Las células fijadas se tiñeron con un anticuerpo anti-tubulina de ratón seguido de anticuerpos secundarios anti-ratón conjugados con colorantes. Véanse las condiciones de obtención de imágenes en la leyenda de la figura 2. Las moléculas de colorante se fotoconmutaron y se visualizaron con un láser de 560 nm; se utilizó un láser de 405 nm para ayudar a la reactivación del colorante al estado emisor.
Figura 2. Comparación de microscopios de campo amplio convencionales con microscopios de campo amplio convencionales Comparación de la microscopía de campo amplio convencional (izquierda) con STORM (derecha) utilizando conjugados de colorante CF®.
Las células fijadas se tiñeron con un anticuerpo anti-tubulina de ratón seguido de un anticuerpo secundario anti-ratón conjugado con colorante CF® (fila superior: CF®647, fila central: CF®660C, fila inferior: CF®680). Para STORM, las muestras se sellaron en un tampón que contenía 5%(p/v) de glucosa, 100 mM de cisteamina, 0,8 mg/mL de glucosa oxidasa y 40 μg/mL de catalasa, en Tris-HCl (pH 7,5). Las muestras se fotografiaron en un microscopio Nikon Ti-Eclipse con PFS y un objetivo CFI Plan Apo Lambda 100x de aceite. Las moléculas de colorante se fotoactivaron y se visualizaron con un láser de 647 nm; se utilizó un láser de 405 nm para ayudar a la reactivación del colorante al estado emisor. La emisión se recogió con una cámara EMCCD Andor iXon Ultra 897 para un total de 100.000 fotogramas por imagen a una frecuencia de 110 Hz.
Las células fijadas se tiñeron con un anticuerpo anti-tubulina de ratón seguido de un anticuerpo secundario anti-ratón conjugado con colorante CF® (fila superior: CF®647, fila central: CF®660C, fila inferior: CF®680). Para STORM, las muestras se sellaron en un tampón que contenía 5%(p/v) de glucosa, 100 mM de cisteamina, 0,8 mg/mL de glucosa oxidasa y 40 μg/mL de catalasa, en Tris-HCl (pH 7,5). Las muestras se fotografiaron en un microscopio Nikon Ti-Eclipse con PFS y un objetivo CFI Plan Apo Lambda 100x de aceite. Las moléculas de colorante se fotoactivaron y se visualizaron con un láser de 647 nm; se utilizó un láser de 405 nm para ayudar a la reactivación del colorante al estado emisor. La emisión se recogió con una cámara EMCCD Andor iXon Ultra 897 para un total de 100.000 fotogramas por imagen a una frecuencia de 110 Hz.
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