Sustrato NeoPRO Femto Western ECL

El Sustrato ECL Western NeoPRO Femto es un sustrato quimioluminiscente de dos componentes diseñado para Western blotting y la detección de proteínas basada en HRP. Proporciona un nivel de detección en el rango de femtogramos medios a bajos y es especialmente adecuado para aplicaciones que requieren una sensibilidad muy alta y una detección fiable de dianas proteicas de baja abundancia.

El sustrato se basa en un sistema de detección quimioluminiscente derivado del luminol. Durante la detección, la peroxidasa de rábano cataliza la oxidación del derivado de luminol, produciendo luz a aproximadamente 425 nm. Los componentes potenciadores incorporados en la formulación aumentan la intensidad y la duración de la señal quimioluminiscente.

El Sustrato ECL Western NeoPRO Femto genera una señal quimioluminiscente fuerte en presencia de un nivel de fondo muy bajo, proporcionando una alta relación señal-ruido. Su duración de señal extendida facilita la adquisición repetida de imágenes y la optimización de las condiciones de exposición.

El producto se suministra como un kit de dos soluciones que contiene una solución de derivado de luminol/potenciador y una solución de peróxido. Los dos componentes se mezclan en una proporción de 1:1 inmediatamente antes de su uso para preparar la solución de trabajo.

• Sustrato quimioluminiscente de dos componentes para Western blotting
• Diseñado para la detección de proteínas en el rango de femtogramos medios a bajos
• Sensibilidad muy alta para dianas proteicas de baja abundancia
• Señal quimioluminiscente fuerte con un nivel de fondo muy bajo
• Alta relación señal-ruido para una visualización clara de bandas de baja intensidad
• Duración de la señal quimioluminiscente extendida
• Detección quimioluminiscente dependiente de HRP
• Soluciones de derivado de luminol/potenciador y peróxido suministradas por separado
• Solución de trabajo preparada mezclando los dos componentes en una proporción de 1:1
• Compatible con anticuerpos secundarios conjugados con HRP
• Compatible con membranas de nitrocelulosa y PVDF para Western blot
• Adecuado para la adquisición de señales mediante sistemas de imagen por quimioluminiscencia o película de autorradiografía
• Dilución recomendada del anticuerpo primario: 1:5.000–1:50.000
• Dilución recomendada del anticuerpo secundario: 1:50.000–1:250.000
• Solo para uso en investigación

1. Preparar la solución de trabajo: Mezcle volúmenes iguales de la Solución A y la Solución B en una proporción de 1:1 inmediatamente antes de su uso.
2. Evitar la contaminación cruzada: Utilice puntas de pipeta limpias y separadas para cada solución madre. No introduzca la Solución A en la Solución B ni la Solución B en la Solución A.
3. Preparar la membrana: Tras la incubación con el anticuerpo primario y el anticuerpo secundario conjugado con HRP, lave la membrana minuciosamente con tampón TBS-T.
4. Enjuagar antes de la detección: Retire la membrana de la bandeja de lavado, enjuáguela dos veces con TBS-T y manténgala húmeda hasta que se aplique el sustrato.
5. Eliminar el exceso de tampón: Permita que el exceso de tampón escurra desde una esquina de la membrana sin permitir que esta se seque.
6. Aplicar el sustrato: Aplique aproximadamente 0,1 mL de solución de trabajo NeoPRO Femto preparada por cm² de membrana.
7. Incubar: Coloque la membrana con el lado de las proteínas hacia arriba y asegúrese de que la solución de trabajo cubra por completo la superficie de la membrana. Incube durante aproximadamente 1,5 minutos.
8. Adquirir la señal: Detecte la señal quimioluminiscente utilizando un dispositivo de imagen compatible o una película de autorradiografía.
9. Optimizar la exposición: Cuando se desconozca la intensidad de señal esperada, se pueden probar tiempos de exposición iniciales de 15 segundos, 30 segundos, 1 minuto y 5 minutos.
10. Optimizar las diluciones de anticuerpos: Ajuste las concentraciones de los anticuerpos primario y secundario cuando sea necesario para obtener una señal específica fuerte con un fondo mínimo.