NeoPRO Pico PLUS Western ECL-substraat

Het NeoPRO Pico PLUS Western ECL Substraat is een tweekomponenten chemiluminescent substraat dat is ontwikkeld voor Western blotting en HRP-gebaseerde proteïnedetectie. Het biedt een detectieniveau in het mid-femtogrambereik en combineert een hoge gevoeligheid met een breed lineair dynamisch bereik voor de detectie en kwantificering van zowel laags- als hoog-abundante eiwitdoelwitten.

Het substraat is gebaseerd op een luminol-afgeleid chemiluminescent detectiesysteem. Tijdens de detectie katalyseert mierikswortelperoxidase de oxidatie van het luminolderivaat, waarbij licht wordt gegenereerd bij ongeveer 425 nm. Versterkende componenten in de formulering verhogen de intensiteit en duur van het chemiluminescente signaal.

Het NeoPRO Pico PLUS Western ECL Substraat wordt geleverd als een kit met twee oplossingen, bestaande uit een luminolderivaat-/enhancer-oplossing en een peroxideoplossing. De twee oplossingen worden direct voor gebruik in een verhouding van 1:1 gemengd om de werkoplossing te bereiden.

De hoge gevoeligheid, het brede lineaire dynamische bereik en de extreem lange signaalduur maken het een veelzijdig substraat voor Western blot-experimenten die een betrouwbare detectie vereisen van eiwitten met uiteenlopende abundantieniveaus. De formulering is ontworpen om minder optimalisatie te vereisen en tegelijkertijd een nauwkeurige chemiluminescente signaalacquisitie te ondersteunen met behulp van imaging-systemen of autoradiografiefilm.

• Tweekomponenten chemiluminescent substraat voor Western blotting
• Ontworpen voor proteïnedetectie in het mid-femtogrambereik
• Hoge gevoeligheid voor het detecteren van eiwitdoelwitten met lage abundantie
• Breed lineair dynamisch bereik voor de analyse van zowel laags- als hoog-abundante eiwitten
• Geschikt voor nauwkeurige kwantitatieve Western blot-analyse
• Extreem lange chemiluminescente signaalduur
• Veelzijdige formulering die minder assay-optimalisatie vereist
• HRP-afhankelijke chemiluminescente detectie
• Luminolderivaat-/enhancer- en peroxideoplossingen afzonderlijk geleverd
• Werkoplossing wordt bereid door de twee componenten in een verhouding van 1:1 te mengen
• Compatibel met HRP-geconjugeerde secundaire antilichamen
• Compatibel met nitrocellulose en PVDF Western blot-membranen
• Geschikt voor chemiluminescente imaging-systemen en autoradiografiefilm
• Aanbevolen verdunning primair antilichaam: 1:1.000–1:15.000
• Aanbevolen verdunning secundair antilichaam: 1:25.000–1:150.000
• Uitsluitend voor onderzoeksdoeleinden

1. Bereid de werkoplossing: Meng gelijke volumes van Oplossing A en Oplossing B in een verhouding van 1:1 onmiddellijk vóór gebruik. Bereid alleen het volume dat nodig is voor het membraan.
2. Vermijd kruisbesmetting: Gebruik afzonderlijke, schone pipettips voor elke voorraadoplossing. Breng geen Oplossing A in Oplossing B of Oplossing B in Oplossing A.
3. Bereid het membraan voor: Na incubatie met het primaire en HRP-geconjugeerde secundaire antilichaam het membraan grondig wassen met TBS-T-buffer.
4. Spoel voor de detectie: Verwijder het membraan uit de wasbak, spoel het tweemaal met TBS-T en houd het vochtig totdat het substraat wordt aangebracht.
5. Verwijder overtollige buffer: Laat overtollige buffer vanaf één hoek van het membraan weglopen zonder dat het membraan opdroogt.
6. Breng het substraat aan: Breng ongeveer 0,1 mL bereide NeoPRO Pico PLUS werkoplossing per cm² membraan aan.
7. Incubeer: Plaats het membraan met de eiwitzijde naar boven en zorg ervoor dat de werkoplossing het membraanoppervlak volledig bedekt. Incubeer gedurende ongeveer 1,5 minuut.
8. Verkrijg het signaal: Detecteer het chemiluminescente signaal met behulp van een compatibel imaging-apparaat of autoradiografiefilm.
9. Optimaliseer de belichting: Wanneer de verwachte signaalintensiteit onbekend is, kunnen initiële belichtingstijden van 15 seconden, 30 seconden, 1 minuut en 5 minuten worden getest.
10. Optimaliseer antilichaamverdunningen: Pas de concentraties van het primaire en secundaire antilichaam aan wanneer dat nodig is om een sterk specifiek signaal met minimale achtergrond te verkrijgen.