Anticorpos primários anti-cavalo conjugados com aloficocianina (APC) são imunorreativos fluorescentes de vermelho distante otimizados para aplicações de citometria de fluxo que requerem excitação com laser vermelho. São produzidos imunizando hospedeiros como cabra ou coelho com imunoglobulinas de cavalo purificadas, são purificados por afinidade e conjugados com APC, uma ficobiliproteína de 105 kDa derivada de cianobactérias com máximos de excitação e emissão de 650 nm e 660 nm, respetivamente. O APC apresenta brilho excepcional, com um elevado coeficiente de extinção molar (≈ 7,0 × 105 M−1cm−1) e um rendimento quântico de aproximadamente 0,68, permitindo a deteção sensível de antigénios equinos expressos em densidades muito baixas. A sua emissão no vermelho distante minimiza a sobreposição espectral com FITC e PE, tornando o APC particularmente adequado para painéis de imunofenotipagem multicolor. As especificidades disponíveis incluem reagentes anti-IgG (H+L), anti-subclasses de IgG e anti-IgM. A pré-adsorção contra imunoglobulinas de rato, ratazana, coelho e humanas reduz ainda mais a reatividade cruzada em amostras experimentais multiespécie.
Aplicações
Os anticorpos anti-cavalo conjugados com APC são amplamente utilizados em citometria de fluxo e na separação celular ativada por fluorescência (FACS), onde a sua elevada intensidade de fluorescência e compatibilidade com lasers vermelhos de 633–647 nm permitem a imunofenotipagem quantitativa de populações de leucócitos equinos e a deteção sensível de citocinas intracelulares. Em ensaios multiplex baseados em esferas, o APC funciona como fluoróforo reporter para a quantificação de citocinas e outros biomarcadores. Estes conjugados são também empregados em microscopia de imunofluorescência e imagem de alto conteúdo para a localização de antigénios em células fixadas. O espectro de emissão no vermelho distante ajuda a reduzir a autofluorescência tecidular, melhorando assim as relações sinal-fundo. As diluições de trabalho típicas para citometria de fluxo variam de 1:50 a 1:500. Estes reagentes destinam-se exclusivamente a uso em investigação e não estão aprovados para procedimentos de diagnóstico.