Fosfofrutoquinase-1 (PFK-1) é uma enzima reguladora crucial na glicólise, a base tanto da respiração anaeróbia quanto aeróbia. Como enzima controladora da velocidade, sua atividade determina a rapidez da glicólise. PFK-1 catalisa a etapa "comprometida" da glicólise, que é a conversão de frutose 6-fosfato e ATP em frutose 1,6-bisfosfato e ADP. Esta enzima é alostérica, composta por quatro subunidades, e é regulada por vários ativadores e inibidores.
Função e Regulação
PFK regula a glicólise por meio de inibição alostérica, permitindo que a célula ajuste a taxa de glicólise de acordo com suas necessidades energéticas. Por exemplo, uma alta proporção de ATP para ADP inibe a PFK e, consequentemente, a glicólise. Em eucariotos, a PFK é ativada por frutose 2,6-bisfosfato, que supera a inibição pelo ATP, proporcionando maior sensibilidade a hormônios como glucagon e insulina.
PFK-1 pertence à família das fosfotransferases e facilita a transferência do grupo γ-fosfato do ATP para a frutose-6-fosfato. O sítio ativo da PFK-1 inclui os sítios de ligação ATP-Mg2+ e F6P. Ativadores alostéricos como AMP e ADP ligam-se ao sítio alostérico para promover a formação do estado R, induzindo mudanças estruturais, enquanto inibidores como ATP e PEP ligam-se ao mesmo sítio para facilitar a formação do estado T, inibindo assim a atividade da enzima.
Kits de Ensaio de Fosfofrutoquinase
Os kits de ensaio de fosfofrutoquinase oferecem um método simples e direto para medir a atividade da PFK em diferentes amostras. Estes kits aproveitam o papel da PFK na conversão de frutose-6-fosfato em frutose-1,6-difosfato, que é a etapa limitante da velocidade da glicólise. A atividade da PFK é regulada por cofatores e modificações pós-traducionais, e pode ser usada para medir o fluxo glicolítico em tecidos. Deficiências na atividade da PFK podem levar a doenças de armazenamento de glicogênio, como a glicogenose tipo VII (doença de Tarui).
Princípio do Ensaio
A atividade da PFK é medida por meio de um ensaio enzimático acoplado. Neste ensaio, a PFK converte frutose-6-fosfato e ATP em frutose-1,6-difosfato e ADP. Subsequentemente, a mistura enzimática converte ADP em AMP e NADH. O NADH resultante reduz uma sonda incolor, produzindo um produto colorimétrico proporcional à atividade da PFK.
