Les anticorps primaires anti-cheval conjugués à l’Alexa Fluor^® 647 sont des immunoréactifs fluorescents émettant dans le rouge lointain, conçus pour la détection multiplexe des antigènes d’origine équine avec un bruit de fond minimal. Produits par immunisation d’animaux hôtes, tels que la chèvre ou le lapin, avec des immunoglobulines de cheval purifiées, ces anticorps sont purifiés par chromatographie d’immunoaffinité puis conjugués de manière covalente à l’Alexa Fluor^® 647, un fluorophore organique présentant des maxima d’excitation et d’émission de 650 et 665 nm, respectivement. Ce fluorophore se caractérise par une excellente photostabilité, un rendement quantique élevé (environ 0,33) et une fluorescence stable sur une large plage de pH (pH 4–10), offrant des performances supérieures à celles de colorants rouges lointains traditionnels tels que le Cy^®5. Son spectre d’émission dans le rouge lointain limite le chevauchement spectral avec des fluorophores tels que le FITC et la PE, tout en réduisant significativement l’autofluorescence des tissus et des fixateurs, ce qui le rend particulièrement adapté aux applications de fluorescence multiplexe.

Applications

Les anticorps conjugués à l’Alexa Fluor^® 647 sont largement utilisés en cytométrie en flux et en tri cellulaire activé par fluorescence (FACS), où leur forte intensité de fluorescence permet la détection sensible de marqueurs équins faiblement exprimés, tels que CD4, CD8 et les molécules du CMH de classe II. En microscopie confocale et en microscopie à super-résolution, leur remarquable photostabilité autorise des acquisitions d’images prolongées et des séries d’images en z-stack avec un photoblanchiment minimal. Ces conjugués sont également compatibles avec les plateformes d’imagerie proche infrarouge pour les études in vivo, les immunodosages multiplex sur billes pour le profilage des cytokines, ainsi que le Western blot fluorescent, où ils permettent une détection directe par fluorescence sans amplification enzymatique. Les dilutions de travail recommandées se situent généralement entre 1:100 et 1:2 000 selon l’application expérimentale. Ces produits sont exclusivement destinés à la recherche et ne sont pas approuvés pour un usage diagnostique.