Anticuerpos primarios anti-caballo conjugados con aloficocianina (APC) son inmunorreactivos fluorescentes de rojo lejano optimizados para aplicaciones de citometría de flujo que requieren excitación con láser rojo. Se producen inmunizando hospedadores como cabra o conejo con inmunoglobulinas de caballo purificadas, se purifican por afinidad y se conjugan con APC, una ficobiliproteína de 105 kDa derivada de cianobacterias con máximos de excitación y emisión de 650 nm y 660 nm, respectivamente. El APC presenta un brillo excepcional, con un elevado coeficiente de extinción molar (≈ 7,0 × 105 M−1cm−1) y un rendimiento cuántico de aproximadamente 0,68, lo que permite la detección sensible de antígenos equinos expresados a densidades muy bajas. Su emisión en el rojo lejano minimiza el solapamiento espectral con FITC y PE, lo que hace que el APC sea especialmente adecuado para paneles de inmunofenotipado multicolor. Las especificidades disponibles incluyen reactivos anti-IgG (H+L), anti-subclases de IgG y anti-IgM. La preadsorción frente a inmunoglobulinas de ratón, rata, conejo y humanas reduce aún más la reactividad cruzada en muestras experimentales multiespecie.
Aplicaciones
Los anticuerpos anti-caballo conjugados con APC se utilizan ampliamente en citometría de flujo y en la clasificación celular activada por fluorescencia (FACS), donde su alta intensidad de fluorescencia y su compatibilidad con láseres rojos de 633–647 nm permiten el inmunofenotipado cuantitativo de poblaciones de leucocitos equinos y la detección sensible de citocinas intracelulares. En ensayos multiplex basados en perlas, el APC funciona como fluoróforo reportero para la cuantificación de citocinas y otros biomarcadores. Estos conjugados también se emplean en microscopía de inmunofluorescencia e imagen de alto contenido para la localización de antígenos en células fijadas. El espectro de emisión en el rojo lejano ayuda a reducir la autofluorescencia tisular, mejorando así las relaciones señal-fondo. Las diluciones de trabajo típicas para citometría de flujo oscilan entre 1:50 y 1:500. Estos reactivos están destinados únicamente a uso en investigación y no están aprobados para procedimientos diagnósticos.