Fosfofructoquinasa-1 (PFK-1) es una enzima reguladora crucial en la glucólisis, la base tanto de la respiración anaerobia como aerobia. Como enzima que controla la velocidad, su actividad determina la rapidez de la glucólisis. PFK-1 cataliza el paso "comprometido" de la glucólisis, que es la conversión de fructosa 6-fosfato y ATP en fructosa 1,6-bisfosfato y ADP. Esta enzima es alostérica, está compuesta por cuatro subunidades y está regulada por varios activadores e inhibidores.
Función y Regulación
PFK regula la glucólisis mediante inhibición alostérica, permitiendo que la célula ajuste la velocidad de la glucólisis según sus necesidades energéticas. Por ejemplo, una alta relación ATP a ADP inhibe la PFK y, por ende, la glucólisis. En eucariotas, la PFK es activada por fructosa 2,6-bisfosfato, que supera la inhibición por ATP, proporcionando mayor sensibilidad a hormonas como glucagón e insulina.
PFK-1 pertenece a la familia de las fosfotransferasas y facilita la transferencia del grupo γ-fosfato del ATP a fructosa-6-fosfato. El sitio activo de PFK-1 incluye los sitios de unión de ATP-Mg2+ y F6P. Activadores alostéricos como AMP y ADP se unen al sitio alostérico para promover la formación del estado R mediante cambios estructurales, mientras que inhibidores como ATP y PEP se unen al mismo sitio para facilitar la formación del estado T, inhibiendo así la actividad enzimática.
Kits de Ensayo de Fosfofructoquinasa
Los kits de ensayo de fosfofructoquinasa ofrecen un método simple y directo para medir la actividad de PFK en diferentes muestras. Estos kits aprovechan el papel de PFK en la conversión de fructosa-6-fosfato a fructosa-1,6-difosfato, que es el paso limitante de la velocidad en la glucólisis. La actividad de PFK está regulada por cofactores y modificaciones postraduccionales, y puede usarse para medir el flujo glucolítico en tejidos. Las deficiencias en la actividad de PFK pueden causar enfermedades de almacenamiento de glucógeno como la glucogenosis tipo VII (enfermedad de Tarui).
Principio del Ensayo
La actividad de PFK se mide mediante un ensayo enzimático acoplado. En este ensayo, PFK convierte fructosa-6-fosfato y ATP en fructosa-1,6-difosfato y ADP. Posteriormente, la mezcla enzimática convierte ADP en AMP y NADH. El NADH resultante reduce una sonda incolora, produciendo un producto colorimétrico proporcional a la actividad de PFK.
