Buffer de transferencia para Western blot es un reactivo fundamental en la transferencia electroforética de proteínas, permitiendo la migración de proteínas desde geles SDS-PAGE hacia membranas de nitrocelulosa o PVDF para su posterior inmunodetección. Desde el trabajo fundamental de Towbin, Staehelin y Gordon, quienes demostraron la transferencia electroforética de proteínas desde geles de poliacrilamida a membranas de nitrocelulosa, la composición del buffer de transferencia ha sido un elemento central para el rendimiento, la reproducibilidad y la calidad de señal del Western blot.

Función en la eficiencia de transferencia de proteínas

Un buffer estándar de transferencia para Western blot contiene normalmente Tris base y glicina, con la adición frecuente de metanol para favorecer la unión de proteínas a la membrana y ayudar a mantener la integridad del gel durante la electrotransferencia. En el Western blot basado en SDS-PAGE, las proteínas se separan según su peso molecular y posteriormente se inmovilizan en una membrana, donde permanecen accesibles para los anticuerpos, como se describió en los estudios clásicos de inmunotransferencia de Burnette. Por lo tanto, el buffer debe proporcionar una fuerza iónica y conductividad adecuadas mientras conserva el patrón proteico obtenido durante la electroforesis.

Optimización para aplicaciones de Western blot

El buffer de transferencia óptimo depende del tamaño de la proteína, el porcentaje del gel, el sistema de transferencia y el tipo de membrana. Los buffers con metanol son ampliamente utilizados para muchos objetivos rutinarios, mientras que las formulaciones con menos metanol o suplementadas con SDS pueden mejorar la transferencia de proteínas de alto peso molecular. Sin embargo, un exceso de SDS o condiciones inadecuadas del buffer pueden aumentar el fondo, generar calor o reducir la retención eficiente en la membrana. Para un análisis Western blot fiable, seleccionar el buffer correcto es esencial para maximizar la recuperación de proteínas, mantener la resolución de las bandas y mejorar la sensibilidad de los métodos de detección quimioluminiscentes, colorimétricos o fluorescentes.

Referencias

• Towbin H., Staehelin T., Gordon J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets. PNAS, 1979;76(9):4350–4354. DOI: 10.1073/pnas.76.9.4350.
• Burnette W.N. “Western blotting”: electrophoretic transfer of proteins from SDS-polyacrylamide gels to unmodified nitrocellulose. Analytical Biochemistry, 1981;112(2):195–203. DOI: 10.1016/0003-2697(81)90281-5.