Cromatografía de afinidad se basa en la unión específica y reversible de una proteína a un ligando unido a la matriz, que se conoce como resina de afinidad. El ligando puede unirse directamente a la proteína de interés o a una etiqueta que esté unida covalentemente a la proteína (Histidina, GST ...). La cromatografía de afinidad es a menudo el procedimiento de purificación más robusto y generalmente se utiliza en las primeras etapas del proceso de purificación. Dependiendo de la aplicación posterior, la purificación por afinidad puede ser el único paso cromatográfico necesario para lograr la pureza requerida.
Las proteínas se pueden purificar por cromatografía de afinidad de manera selectiva o no selectiva. En la cromatografía de afinidad selectiva, se utiliza un ligando específico para una proteína o etiqueta covalentemente unida. En la cromatografía de afinidad no selectiva, como Protein A, G, L para inmunoglobulinas, o heparina para proteínas que se unen al ADN, o lectina para glucoproteínas, el ligando se une a un grupo de proteínas con capacidades de unión similares.
Resinas disponibles:
- Nickel-NTA: para purificación de proteínas marcadas con polihistidina
- Cobalt-NTA: para purificación de proteínas marcadas con polihistidina
- GST: para purificación de proteínas marcadas con GST
- Protein A: para purificación de anticuerpos
- Protein G: para purificación de anticuerpos
