Fast Protein Liquid Chromatography (FPLC) es una forma especializada de cromatografía líquida ampliamente utilizada para el análisis y la purificación de proteínas y otras macromoléculas biológicas. Desarrollada originalmente por Pharmacia en 1982, la FPLC fue diseñada como una técnica cromatográfica de presión media optimizada para biomoléculas, particularmente proteínas, que son sensibles a condiciones extremas como alta presión, pH extremos y solventes orgánicos.
Principios y Mecanismo
La FPLC separa los componentes de una mezcla en función de sus diferentes afinidades entre una fase móvil y una fase estacionaria. La fase móvil en FPLC es una solución tampón acuosa, cuyo caudal es controlado de manera precisa por una bomba de desplazamiento positivo, generalmente mantenida entre 1 y 5 mL/min bajo baja presión (por debajo de 5 bar). La fase estacionaria consiste en perlas de resina porosa, a menudo agarosa entrecruzada, empaquetadas en columnas. Estas perlas varían en tamaño y química superficial dependiendo del tipo de separación requerida.
Aplicaciones
- Purificación de proteínas recombinantes, anticuerpos y enzimas.
- Aislamiento de ácidos nucleicos como oligonucleótidos y plásmidos.
- Preparación de proteínas para estudios estructurales y funcionales.
- Eliminación de contaminantes como endotoxinas en preparaciones de proteínas.
Ventajas
- Condiciones operativas suaves: La baja presión y los tampones acuosos previenen la desnaturalización de las proteínas.
- Alta resolución y reproducibilidad: El pequeño tamaño de las perlas y el control preciso del flujo mejoran la calidad de la separación.
- Automatización: Facilita la elución en gradiente, el manejo de muestras y la recolección de fracciones.
- Escalabilidad: Apta para purificación a escala analítica, preparativa o industrial.
- Versatilidad: Compatible con múltiples modos cromatográficos y tipos de muestras biológicas.
La FPLC representa una técnica fundamental en la bioquímica de proteínas y la biología molecular, ofreciendo una plataforma robusta, suave y versátil para la purificación y análisis de proteínas. Su desarrollo ha facilitado enormemente la producción de proteínas de alta pureza esenciales para la investigación, diagnóstico y aplicaciones terapéuticas.
