Ensayo de histona acetiltransferasa (HAT) son métodos analíticos utilizados para medir la actividad enzimática de las histona acetiltransferasas, enzimas que transfieren grupos acetilo desde la acetil-coenzima A (acetil-CoA) a residuos de lisina en proteínas histonas. Estos ensayos se aplican ampliamente en epigenética, biología de la cromatina y descubrimiento de fármacos, ya que la actividad de HAT está estrechamente asociada con la regulación génica y la accesibilidad de la cromatina. También son herramientas valiosas para el cribado de compuestos que inhiben o modulan la función de HAT.

Principio del ensayo

El principio fundamental de un ensayo de HAT es la detección de la transferencia de grupos acetilo desde la acetil-CoA a un sustrato de histona o un péptido derivado de histona. Dependiendo del formato del ensayo, el producto de la reacción puede cuantificarse utilizando marcaje con radioisótopos, detección basada en fluorescencia o lecturas colorimétricas. Estos enfoques apoyan tanto estudios mecanicistas de enzymología como aplicaciones de cribado de alto rendimiento para la identificación de inhibidores.

Formatos comunes de ensayos

Los ensayos de HAT están disponibles en varios formatos, incluyendo sistemas radiométricos, fluorescentes y colorimétricos.

• Ensayo radiométrico: A menudo se considera un método de referencia porque mide directamente la transferencia de acetilo utilizando acetil-CoA marcada, ofreciendo alta sensibilidad y especificidad.
• Ensayo fluorescente: Permite una detección rápida y sensible sin el uso de materiales radiactivos y es compatible con flujos de trabajo de laboratorio automatizados.
• Ensayo colorimétrico: Frecuentemente utilizado en aplicaciones de laboratorio de rutina debido a su simplicidad y compatibilidad con formatos de placas de 96 pocillos para el cribado eficiente de compuestos.