Clorofórmio é um solvente apolar clássico em bioquímica, indispensável para extrações de lípidos e separações de fases devido à sua densidade e solubilidade seletiva para biomoléculas anfipáticas.

Propriedades químicas

O clorofórmio (CHCl₃) apresenta um carbono tetraédrico ligado a três átomos de cloro e um átomo de hidrogénio, formando um líquido denso e incolor com uma densidade de aproximadamente 1,49 g/mL a 25 °C. Tem um ponto de ebulição de 61,2 °C e um ponto de fusão de –63,5 °C. O clorofórmio mostra baixa solubilidade em água (cerca de 8 g/L), mas é miscível com muitos solventes orgânicos como metanol e hexano. O seu momento dipolar (1,04 D) permite interações de aceitação de ligações de hidrogénio. O solvente é altamente volátil, com uma pressão de vapor de cerca de 197 mmHg a 25 °C. Graus estabilizados contendo etanol ou amileno são comumente usados para inibir a formação de fosgénio sob exposição à luz e ao oxigénio.

Aplicações bioquímicas

Na bioquímica de lípidos, o clorofórmio é um solvente chave no método de extração Folch (geralmente na proporção 2:1 clorofórmio:metanol), permitindo a partição de fosfolípidos e glicolípidos na fase orgânica inferior para técnicas analíticas subsequentes como cromatografia em camada fina (TLC), cromatografia gasosa-espectrometria de massa (GC-MS) ou análise por ressonância magnética nuclear (RMN) de ácidos gordos e gangliosídeos. É também utilizado para a extração de proteínas de membrana ou partículas virais a partir de lisados aquosos. Em fluxos de trabalho de biologia molecular, o clorofórmio é empregado na purificação de ácidos nucleicos por fenol-clorofórmio para desnaturar proteínas enquanto mantém a integridade estrutural do ADN e ARN. Adicionalmente, etapas de lavagem com clorofórmio são aplicadas na análise de hidratos de carbono para remover contaminantes lipofílicos residuais após hidrólise, melhorando a pureza da amostra para cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC).